Foreasy HS Taq DNA Polymerase
Disgrifiad
Mae Foreasy HS Taq DNA Polymerase yn ensym Taq newydd a fynegir mewn bacteria peirianneg Escherichia coli gan dechnoleg ailgyfuno genynnau.Ar ôl i'r ensym gael ei drin â phroses arbennig, mae'n's gweithgaredd yn cael ei atal cyn actifadu thermol, a thrwy hynny atal yr ymhelaethu amhenodol a achosir gan anelio amhenodol o preimio neu dimers paent preimio o dan amodau tymheredd isel.Mae'r cynnyrch hwn yn addas ar gyfer PCR React penodol iawnion, M ultiple x PCR , cynnwys GC uchel (> 60%) ,gydastrwythur eilaiddneu arallgenom cefndir cryficsymhelaethu a genom ar raddfa fawricscanfod ymhelaethiad.Mae gan yr ensym actifedd DNA polymeras 5' → 3' a 5' → 3' actifedd exonuclease, ond dim actifedd ecsiwiwcleas 3' → 5'.
Cydrannau Kit
Cydran | IM-01021 | IM-01022 | IM-01023 |
Polymeras DNA Taq HS Foreasy (5 U/μL) | 5000 U (1 mL) | 50 KU (10 mL) | 500 KU (100 mL) |
2 × Byffer Ymateb Taq | 25mL ×5 | 250 ml × 5 | 500 mL × 25 |
Nodweddion a manteision
- Penodoldeb uchel: Yr ensym â gweithgaredd cychwyn poeth uchel.
- Ymhelaethiad Cyflym: 10 eiliad / kb.
- Addasrwydd templed uchel: gellir ei ddefnyddio i ymhelaethu'n effeithlon UchelGCgwerthatempledi DNA anodd eu chwyddo amrywiol.
- Ffyddlondeb cryf: Mae'r ffyddlondeb yn 6 gwaithof Ensym Taq cyffredin.
Cais cit
- System PCR / qPCR amrywiol a system PCR uniongyrchol
- Darn DNA Chwyddedig PCR
- marc DNA
- Dilyniannu DNA
- PCR ynghyd ag A chynffon
Diffiniad o Weithgaredd
1U : Swm yr ensym sydd ei angen i ymgorffori 10 nmol oDNAi mewn i fater asid-anhydawdd gan ddefnyddio DNA sberm eog wedi'i actifadu fel templed / paent preimio, 74 °C, 30 munud.
Cyflwr Ymateb
Tymheredd | Amser Ymateb | Amser beicio |
37°C | 5 mun | 1 |
94°C | 5 mun | 1 |
94°C | 10 eiliad | 40 |
60°C | 10 eiliad |
Nodyn:Ar gyfer systemau 10 µL a 20 µL, ychwanegwch gyfaint cyfartal o olew mwynol os nad oes gan y cylchredwr thermol gaead gwres.
Mae amodau adwaith PCR yn amrywio yn dibynnu ar amodau strwythurol templedi, paent preimio, ac ati.Yn y llawdriniaeth benodol, mae angen dylunio'r amodau adwaith gorau posibl, gan gynnwys tymheredd anelio, amser ymestyn, ac ati, yn ôl yr amodau penodol megis y math o dempled, maint y darn targed, dilyniant sylfaen y darn chwyddedig, a chynnwys GC a hyd y paent preimio.
Storio
-20 ± 5 ° C am 2 flynedd neu ar -80 ° C ar gyfer storio tymor hir.
Dim signalau ymhelaethu
1.Mae'r Taq DNA Polymerase yn y pecyn yn colli ei weithgaredd oherwydd storio amhriodol neu ddod i ben y pecyn.
Argymhelliad: Cadarnhau amodau storio'r pecyn;ail-ychwanegu swm priodol o Taq DNA Polymerase i'r system PCR neu brynu Pecyn PCR Amser Real newydd ar gyfer arbrofion cysylltiedig.
2.Mae yna lawer o atalyddion Taq DNA Polymerase yn y templed DNA.
Awgrym: Ail buro'r templed neu leihau faint o dempled a ddefnyddir.
3. Nid yw'r crynodiad Mg2+ yn addas.
Argymhelliad: Crynodiad Mg2+ y2 × Real PCR Mix a ddarparwn yw 3.5mM.Fodd bynnag, ar gyfer rhai paent preimio a thempledi arbennig, gall y crynodiad Mg2+ fod yn uwch.Felly, gallwch chi ychwanegu MgCl2 yn uniongyrchol i wneud y gorau o'r crynodiad Mg2+.Argymhellir cynyddu'r Mg2+ 0.5mM bob tro ar gyfer optimeiddio.
4. Nid yw'r amodau ymhelaethu PCR yn addas, ac mae'r dilyniant neu'r crynodiad preimio yn amhriodol.
Awgrym: cadarnhau cywirdeb y dilyniant primer ac nid yw'r paent preimio wedi'i ddiraddio;os nad yw'r signal ymhelaethu yn dda, ceisiwch ostwng y tymheredd anelio ac addasu'r crynodiad preimio yn briodol.
5.Mae swm y templed yn rhy ychydig neu'n ormod.
Argymhelliad: Perfformio gwanhau graddiant llinoleiddio templed, a dewiswch y crynodiad templed gyda'r effaith PCR gorau ar gyfer arbrawf PCR Amser Real.
Mae gan NTC werth fflworoleuedd rhy uchel
Halogi 1.Reagent a achosir yn ystod gweithrediad.
Argymhelliad: Amnewid adweithyddion newydd ar gyfer arbrofion PCR Amser Real.
Digwyddodd 2.Contamination wrth baratoi'r system adwaith PCR.
Argymhelliad: Cymerwch y mesurau amddiffynnol angenrheidiol yn ystod y llawdriniaeth, megis: gwisgo menig latecs, defnyddio blaen pibed gyda hidlydd, ac ati.
3.Mae'r paent preimio wedi'i ddiraddio, a bydd diraddio'r paent preimio yn achosi mwyhad amhenodol.
Awgrym: Defnyddiwch electrofforesis SDS-PAGE i ganfod a yw'r paent preimio wedi'i ddiraddio, a rhoi paent preimio newydd yn eu lle ar gyfer arbrofion PCR Amser Real.
Dimer primer neu ymhelaethiad amhenodol
Nid yw crynodiad 1.The Mg2+ yn addas.
Argymhelliad: Crynodiad Mg2+ y 2 × Real PCR EasyTM Mix a ddarparwn yw 3.5 mM.Fodd bynnag, ar gyfer rhai paent preimio a thempledi arbennig, gall y crynodiad Mg2+ fod yn uwch.Felly, gallwch chi ychwanegu MgCl2 yn uniongyrchol i wneud y gorau o'r crynodiad Mg2+.Argymhellir cynyddu'r Mg2+ 0.5mM bob tro ar gyfer optimeiddio.
2.The PCR anelio tymheredd yn rhy isel.
Awgrym: Cynyddu tymheredd anelio PCR 1 ℃ neu 2 ℃ bob tro.
3.Mae'r cynnyrch PCR yn rhy hir.
Argymhelliad: Dylai hyd y cynnyrch PCR Amser Real fod rhwng 100-150bp, dim mwy na 500bp.
4.Mae'r paent preimio yn cael ei ddiraddio, a bydd diraddio'r paent preimio yn arwain at ymddangosiad ymhelaethu penodol.
Awgrym: Defnyddiwch electrofforesis SDS-PAGE i ganfod a yw'r paent preimio wedi'i ddiraddio, a rhoi paent preimio newydd yn eu lle ar gyfer arbrofion PCR Amser Real.
5.Mae'r system PCR yn amhriodol, neu mae'r system yn rhy fach.
Awgrym: Mae'r system adwaith PCR yn rhy fach a fydd yn achosi i'r cywirdeb canfod leihau.Mae'n well defnyddio'r system adwaith a argymhellir gan yr offeryn PCR meintiol i ail-redeg yr arbrawf PCR Amser Real.
Ailadroddadwyedd gwael o werthoedd meintiol
1.Mae'r offeryn yn camweithio.
Awgrym: Efallai y bydd gwallau rhwng pob twll PCR o'r offeryn, gan arwain at atgynhyrchu gwael wrth reoli neu ganfod tymheredd.Gwiriwch yn unol â chyfarwyddiadau'r offeryn cyfatebol.
2.Nid yw'r purdeb sampl yn dda.
Argymhelliad: Bydd samplau amhur yn arwain at atgynhyrchu gwael yr arbrawf, sy'n cynnwys purdeb y templed a'r paent preimio.Mae'n well ail-buro'r templed, ac mae'n well puro'r paent preimio trwy SDS-PAGE.
3.The paratoi system PCR a storio amser yn rhy hir.
Awgrym: Defnyddiwch y system PCR Amser Real ar gyfer arbrawf PCR yn syth ar ôl ei baratoi, a pheidiwch â'i adael o'r neilltu am gyfnod rhy hir.
4. Nid yw'r amodau ymhelaethu PCR yn addas, ac mae'r dilyniant neu'r crynodiad preimio yn amhriodol.
Awgrym: cadarnhau cywirdeb y dilyniant primer ac nid yw'r paent preimio wedi'i ddiraddio;os nad yw'r signal ymhelaethu yn dda, ceisiwch ostwng y tymheredd anelio ac addasu'r crynodiad preimio yn briodol.
5.Mae'r system PCR yn amhriodol, neu mae'r system yn rhy fach.
Awgrym: Mae'r system adwaith PCR yn rhy fach a fydd yn achosi i'r cywirdeb canfod leihau.Mae'n well defnyddio'r system adwaith a argymhellir gan yr offeryn PCR meintiol i ail-redeg yr arbrawf PCR Amser Real.