Polymeras DNA Taq Foreasy
Disgrifiad
Mae Foreasy Taq DNA Polymerase yn ensym Taq newydd a fynegir mewn bacteria peirianneg Escherichia coli gan dechnoleg ailgyfuno genynnau.Mae gan yr ensym ei hun weithgaredd cychwyn poeth penodol a gellir ei ddefnyddio ar gyfer PCR confensiynol a qPCR;mae ganddo actifedd DNA polymeras 5'→3' a gweithgaredd ec-niwcleas 5'→3', ond dim gweithgaredd ec-niwcleas 3'→5'.
Cydrannau Kit
Cydran | IM-01011 | IM-01012 | IM-01013 |
Polymeras DNA Taq Foreasy(5 U/μL) | 5000 U (1 mL) | 50 KU (10 mL) | 500 KU (100 mL) |
2 × Byffer Ymateb Taq | 25 ml × 5 | 250 ml × 5 | 500 ml × 25 |
Nodweddion a manteision
- Penodoldeb uchel: Mae gan yr ensym weithgaredd cychwyn poeth penodol.
- Ymhelaethiad Cyflym: 10 eiliad / kb.
- Templed hynod addasadwy: gellir ei ddefnyddio i ymhelaethu'n effeithlon ar GC Templed DNA gwerth uchel, anodd ei chwyddo amrywiol.
- Ffyddlondeb cryf: Taq Enzyme cyffredin 6 gwaith.
- Sefydlogrwydd thermol cryf: Gellir ei osod ar 37 ° C am wythnos ac mae'n cynnal mwy na 90% o weithgaredd
Cais cit
Systemau PCR/qPCR amrywiol a systemau PCR uniongyrchol
Ymhelaethiad PCR ar ddarnau DNA
Labelu DNA
Dilyniant DNA
PCR A-gynffon
U Diffiniad
1U: Swm yr ensym sydd ei angen i ymgorffori 10 nmol o ddeocsyniwcleotidau mewn mater anhydawdd asid gan ddefnyddio DNA sberm eog actifedig fel templed/preimwr am 30 munud ar 74°C.
Cyflwr Ymateb
Tymheredd | Amser | Beicio |
37°C | 5 munud | 1 |
94°C | 5 munud | 1 |
94°C | 10 eiliad | 35 |
60°C | 10 eiliad | |
72°C | 20 eiliad/kb | |
72°C | 2 funud | 1 |
Storio
-20 ± 5 ° C am 2 flynedd neu ar -80 ° C ar gyfer storio tymor hir.
Dim signalau ymhelaethu
1.Mae'r Taq DNA Polymerase yn y pecyn yn colli ei weithgaredd oherwydd storio amhriodol neu ddod i ben y pecyn.
Argymhelliad: Cadarnhau amodau storio'r pecyn;ail-ychwanegu swm priodol o Taq DNA Polymerase i'r system PCR neu brynu Pecyn PCR Amser Real newydd ar gyfer arbrofion cysylltiedig.
2.Mae yna lawer o atalyddion Taq DNA Polymerase yn y templed DNA.
Awgrym: Ail buro'r templed neu leihau faint o dempled a ddefnyddir.
3. Nid yw'r crynodiad Mg2+ yn addas.
Argymhelliad: Crynodiad Mg2+ y2 × Real PCR Mix a ddarparwn yw 3.5mM.Fodd bynnag, ar gyfer rhai paent preimio a thempledi arbennig, gall y crynodiad Mg2+ fod yn uwch.Felly, gallwch chi ychwanegu MgCl2 yn uniongyrchol i wneud y gorau o'r crynodiad Mg2+.Argymhellir cynyddu'r Mg2+ 0.5mM bob tro ar gyfer optimeiddio.
4. Nid yw'r amodau ymhelaethu PCR yn addas, ac mae'r dilyniant neu'r crynodiad preimio yn amhriodol.
Awgrym: cadarnhau cywirdeb y dilyniant primer ac nid yw'r paent preimio wedi'i ddiraddio;os nad yw'r signal ymhelaethu yn dda, ceisiwch ostwng y tymheredd anelio ac addasu'r crynodiad preimio yn briodol.
5.Mae swm y templed yn rhy ychydig neu'n ormod.
Argymhelliad: Perfformio gwanhau graddiant llinoleiddio templed, a dewiswch y crynodiad templed gyda'r effaith PCR gorau ar gyfer arbrawf PCR Amser Real.
Mae gan NTC werth fflworoleuedd rhy uchel
Halogi 1.Reagent a achosir yn ystod gweithrediad.
Argymhelliad: Amnewid adweithyddion newydd ar gyfer arbrofion PCR Amser Real.
Digwyddodd 2.Contamination wrth baratoi'r system adwaith PCR.
Argymhelliad: Cymerwch y mesurau amddiffynnol angenrheidiol yn ystod y llawdriniaeth, megis: gwisgo menig latecs, defnyddio blaen pibed gyda hidlydd, ac ati.
3.Mae'r paent preimio wedi'i ddiraddio, a bydd diraddio'r paent preimio yn achosi mwyhad amhenodol.
Awgrym: Defnyddiwch electrofforesis SDS-PAGE i ganfod a yw'r paent preimio wedi'i ddiraddio, a rhoi paent preimio newydd yn eu lle ar gyfer arbrofion PCR Amser Real.
Dimer primer neu ymhelaethiad amhenodol
Nid yw crynodiad 1.The Mg2+ yn addas.
Argymhelliad: Crynodiad Mg2+ y 2 × Real PCR EasyTM Mix a ddarparwn yw 3.5 mM.Fodd bynnag, ar gyfer rhai paent preimio a thempledi arbennig, gall y crynodiad Mg2+ fod yn uwch.Felly, gallwch chi ychwanegu MgCl2 yn uniongyrchol i wneud y gorau o'r crynodiad Mg2+.Argymhellir cynyddu'r Mg2+ 0.5mM bob tro ar gyfer optimeiddio.
2.The PCR anelio tymheredd yn rhy isel.
Awgrym: Cynyddu tymheredd anelio PCR 1 ℃ neu 2 ℃ bob tro.
3.Mae'r cynnyrch PCR yn rhy hir.
Argymhelliad: Dylai hyd y cynnyrch PCR Amser Real fod rhwng 100-150bp, dim mwy na 500bp.
4.Mae'r paent preimio yn cael ei ddiraddio, a bydd diraddio'r paent preimio yn arwain at ymddangosiad ymhelaethu penodol.
Awgrym: Defnyddiwch electrofforesis SDS-PAGE i ganfod a yw'r paent preimio wedi'i ddiraddio, a rhoi paent preimio newydd yn eu lle ar gyfer arbrofion PCR Amser Real.
5.Mae'r system PCR yn amhriodol, neu mae'r system yn rhy fach.
Awgrym: Mae'r system adwaith PCR yn rhy fach a fydd yn achosi i'r cywirdeb canfod leihau.Mae'n well defnyddio'r system adwaith a argymhellir gan yr offeryn PCR meintiol i ail-redeg yr arbrawf PCR Amser Real.
Ailadroddadwyedd gwael o werthoedd meintiol
1.Mae'r offeryn yn camweithio.
Awgrym: Efallai y bydd gwallau rhwng pob twll PCR o'r offeryn, gan arwain at atgynhyrchu gwael wrth reoli neu ganfod tymheredd.Gwiriwch yn unol â chyfarwyddiadau'r offeryn cyfatebol.
2.Nid yw'r purdeb sampl yn dda.
Argymhelliad: Bydd samplau amhur yn arwain at atgynhyrchu gwael yr arbrawf, sy'n cynnwys purdeb y templed a'r paent preimio.Mae'n well ail-buro'r templed, ac mae'n well puro'r paent preimio trwy SDS-PAGE.
3.The paratoi system PCR a storio amser yn rhy hir.
Awgrym: Defnyddiwch y system PCR Amser Real ar gyfer arbrawf PCR yn syth ar ôl ei baratoi, a pheidiwch â'i adael o'r neilltu am gyfnod rhy hir.
4. Nid yw'r amodau ymhelaethu PCR yn addas, ac mae'r dilyniant neu'r crynodiad preimio yn amhriodol.
Awgrym: cadarnhau cywirdeb y dilyniant primer ac nid yw'r paent preimio wedi'i ddiraddio;os nad yw'r signal ymhelaethu yn dda, ceisiwch ostwng y tymheredd anelio ac addasu'r crynodiad preimio yn briodol.
5.Mae'r system PCR yn amhriodol, neu mae'r system yn rhy fach.
Awgrym: Mae'r system adwaith PCR yn rhy fach a fydd yn achosi i'r cywirdeb canfod leihau.Mae'n well defnyddio'r system adwaith a argymhellir gan yr offeryn PCR meintiol i ail-redeg yr arbrawf PCR Amser Real.