Esboniad o dermau bioleg moleciwlaidd sylfaenol
1. cDNA a cccDNA: DNA llinyn dwbl yw cDNA wedi'i syntheseiddio gan drawsgrifiad gwrthdro o mRNA;DNA crwn caeedig plasmid dwbl yw cccDNA sy'n rhydd o'r cromosom.
2. Uned blygu safonol: gall yr uned strwythur uwchradd protein α-helix a β-daflen ffurfio blociau strwythurol gyda threfniadau geometrig arbennig trwy amrywiol polypeptidau cysylltu.Gelwir y math hwn o blygu penderfynol fel arfer yn strwythur uwchradd super.Gellir disgrifio bron pob strwythur trydyddol gan y mathau plygu hyn, a hyd yn oed eu mathau cyfun, felly fe'u gelwir hefyd yn unedau plygu safonol.
3. CAP: cylchol adenosine monophosphate (cAMP) protein derbynnydd CRP (protein derbynnydd cAMP), gelwir y cymhleth a ffurfiwyd ar ôl y cyfuniad o cAMP a CRP activating protein CAP (cAMP activated protein)
4. Dilyniant palindromig: Dilyniant cyflenwol cefn segment o ddarn DNA, yn aml safle ensym cyfyngu.
5. micRNA: RNA ymyrryd cyflenwol neu RNA antisense, sy'n ategu'r dilyniant mRNA a gall atal y cyfieithiad o mRNA.
6. Ribosym: RNA gyda gweithgaredd catalytig, sy'n chwarae rhan awtocatalytig yn y broses splicing o RNA.
7. Motiff: Mae rhai rhanbarthau lleol sydd â siâp tri dimensiwn tebyg a thopoleg yn strwythur gofodol moleciwlau protein
8. Peptid signal: peptid â 15-36 o weddillion asid amino yn y N-terminws yn ystod synthesis protein, sy'n arwain trawsbilen y protein.
9. Attenuator: Dilyniant niwcleotid rhwng rhanbarth gweithredwr a genyn adeileddol sy'n terfynu trawsgrifiad.
10. Magic Spot: Pan fydd y bacteria yn tyfu ac yn dod ar draws diffyg llwyr o asidau amino, bydd y bacteria yn cynhyrchu ymateb brys i atal mynegiant pob genyn.Y signalau sy'n cynhyrchu'r ymateb brys hwn yw guanosin tetraffosffad (ppGpp) a phentaphosphate guanosine (ppGpp).Nid dim ond un neu ychydig o operonau yw rôl PpGpp a pppGpp, ond mae'n effeithio ar nifer fawr ohonynt, felly fe'u gelwir yn uwch-reoleiddwyr neu'n smotiau hud.
11. Elfen hyrwyddwr i fyny'r afon: yn cyfeirio at y dilyniant DNA sy'n chwarae rhan reoleiddiol yng ngweithgaredd yr hyrwyddwr, megis TATA yn y rhanbarth -10, TGACA yn y rhanbarth -35, enhancers, a attenuators.
12. Stiliwr DNA: segment DNA wedi'i labelu â dilyniant hysbys, a ddefnyddir yn eang i ganfod dilyniannau anhysbys a sgrinio genynnau targed.
13. Dilyniant SD: Dyma'r dilyniant rhwymol o ribosom ac mRNA, sy'n rheoleiddio cyfieithu.
14. Gwrthgorff Monoclonaidd: Gwrthgorff sy'n gweithredu yn erbyn un penderfynydd antigenig yn unig.
15. Cosmid: Mae'n fector DNA alldarddol wedi'i adeiladu'n artiffisial sy'n cadw'r rhanbarthau COS ar ddau ben y ffag ac sydd wedi'i gysylltu â'r plasmid.
16. Sgrinio sbot glas-gwyn: genyn LacZ (amgodio β-galactosidase), gall yr ensym ddadelfennu'r swbstrad cromogenig X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indole-β-D-galactosidase) i gynhyrchu glas, gan wneud y straen yn las.Pan fewnosodir y DNA alldarddol, ni ellir mynegi'r genyn LacZ, ac mae'r straen yn wyn, er mwyn sgrinio'r bacteria ailgyfunol.Gelwir hyn yn sgrinio glas-gwyn.
17. Elfen cis-weithredol: Dilyniant penodol o fasau mewn DNA sy'n rheoli mynegiant genynnau.
18. Ensym Klenow: Darn mawr o DNA polymeras I, ac eithrio bod y actifedd ecsyniwcleas 5' 3' yn cael ei dynnu o'r DNA polymeras I holoenzyme
19. PCR wedi'i angori: a ddefnyddir i chwyddo'r DNA o ddiddordeb gyda dilyniant hysbys ar un pen.Ychwanegwyd cynffon poly-dG at un pen y dilyniant anhysbys, ac yna defnyddiwyd y poly-dC a'r dilyniant hysbys fel paent preimio ar gyfer ymhelaethu PCR.
20. Protein ymasiad: Mae genyn protein ewcaryotig wedi'i gysylltu â genyn alldarddol, ac mae'r protein sy'n cynnwys y cyfieithiad o brotein genyn gwreiddiol a phrotein alldarddol yn cael ei fynegi ar yr un pryd.
Termau bioleg moleciwlaidd eraill
1. Y map ffisegol o DNA yw'r drefn y mae'r darnau (cyfyngiad endonuclease-treulio) o'r moleciwl DNA wedi'u trefnu.
2. Rhennir holltiad RNase yn ddau fath (awtocatalysis) a (heterocatalysis).
3. Mae tri ffactor cychwyn mewn procaryotes sef (IF-1), (IF-2) ac (IF-3).
4. Mae angen arweiniad ar broteinau trawsbilen (peptidau signal), a rôl gwarchodwyr protein yw (yn helpu i blygu'r gadwyn peptid i gydffurfiad brodorol y protein).
5. Yn gyffredinol, gellir rhannu elfennau mewn hyrwyddwyr yn ddau fath: (elfennau hyrwyddwr craidd) ac (elfennau hyrwyddwr i fyny'r afon).
6. Mae cynnwys ymchwil bioleg foleciwlaidd yn bennaf yn cynnwys tair rhan: (bioleg moleciwlaidd strwythurol), (mynegiant genynnau a rheoleiddio), a (technoleg ailgyfuno DNA).
7. Y ddau arbrawf allweddol sy'n dangos mai DNA yw'r deunydd genetig yw (haint niwmococws llygod) a (haint T2 phage Escherichia coli).potensial).
8. Mae dau brif wahaniaeth rhwng hnRNA ac mRNA: (mae hnRNA yn cael ei rannu yn y broses o drawsnewid yn mRNA), (mae pen 5' yr mRNA yn cael ei ychwanegu gyda chap m7pGppp, ac mae polyadenylation ychwanegol ar ben 3' y gynffon asid mRNA (polyA).
9. Manteision y ffurf aml-is-uned o brotein yw (mae is-uned yn ddull darbodus ar gyfer defnyddio DNA), (gall leihau effaith gwallau ar hap mewn synthesis protein ar weithgaredd protein), (gall gweithgaredd fod yn effeithlon iawn ac yn gyflym yn cael ei agor a'i gau).
10. Mae prif gynnwys mecanwaith plygu protein theori cnewyllol cyntaf yn cynnwys (cnewyllyn), (cyfoethogi strwythurol), (ad-drefnu terfynol).
11. Mae galactos yn cael effaith ddeuol ar facteria;ar y naill law (gellir ei ddefnyddio fel ffynhonnell carbon ar gyfer twf celloedd);ar y llaw arall (mae hefyd yn elfen o'r cellfur).Felly, mae angen hyrwyddwr cAMP-CRP-annibynnol S2 ar gyfer y synthesis parhaol ar y lefel gefndir;ar yr un pryd, mae angen hyrwyddwr cAMP-CRP-ddibynnol S1 i reoleiddio'r synthesis lefel uchel.Mae trawsgrifio yn dechrau o ( S2 ) gyda G ac o ( S1 ) heb G.
12. Gelwir technoleg DNA ailgyfunol hefyd yn (clonio genynnau) neu (clonio moleciwlaidd).Y nod yn y pen draw yw (trosglwyddo'r wybodaeth enetig DNA mewn un organeb i organeb arall).Mae arbrawf ailgyfuno DNA nodweddiadol fel arfer yn cynnwys y camau canlynol: (1) Tynnu genyn targed (neu enyn alldarddol) yr organeb rhoddwr, a'i gysylltu'n ensymatig â moleciwl DNA arall (fector clonio) i ffurfio moleciwl DNA ailgyfunol newydd.② Mae'r moleciwl DNA ailgyfunol yn cael ei drosglwyddo i'r gell derbyn a'i ailadrodd yn y gell derbyn.Gelwir y broses hon yn drawsnewid.③ Sgrinio a nodi'r celloedd derbyn hynny sydd wedi amsugno'r DNA ailgyfunol.④ Meithrinwch y celloedd sy'n cynnwys DNA ailgyfunol mewn symiau mawr i ganfod a yw'r genyn cymorth tramor yn cael ei fynegi.
13. Mae dau fath o ddyblygiad plasmid: gelwir y rhai sy'n cael eu rheoli'n llym gan synthesis protein celloedd lletyol (plasmidau tynn), a gelwir y rhai nad ydynt yn cael eu rheoli'n llym gan synthesis protein celloedd lletyol (plasmidau hamddenol).
14. Dylai fod gan y system adwaith PCR yr amodau canlynol: a.Preimwyr DNA (tua 20 bas) gyda dilyniannau cyflenwol ar bob pen i ddau edefyn y genyn targed i'w gwahanu.b.Ensymau gyda sefydlogrwydd thermol fel: TagDNA polymeras.c, dNTPd, dilyniant DNA o ddiddordeb fel templed
15. Mae proses adwaith sylfaenol PCR yn cynnwys tri cham: (dadnatureiddio), (anelio), ac (estyniad).
16. Mae proses sylfaenol anifeiliaid trawsenynnol fel arfer yn cynnwys: ①Cyflwyno genyn tramor wedi'i glonio i gnewyllyn wy wedi'i ffrwythloni neu fôn-gell embryonig;② Trawsblannu'r wy wedi'i ffrwythloni wedi'i frechu neu'r bôn-gell embryonig i'r groth fenywaidd;③Cwblhau datblygiad a thwf embryonig Ar gyfer yr epil â genynnau tramor;④ Defnyddiwch yr anifeiliaid hyn sy'n gallu cynhyrchu proteinau tramor fel stoc bridio i fridio llinellau homosygaidd newydd.
17. Cynhyrchir llinellau cell hybridoma trwy hybrideiddio celloedd (spleen B) â chelloedd (myeloma), a chan fod (celloedd dueg) yn gallu defnyddio hypoxanthine a (celloedd asgwrn) yn darparu swyddogaethau cellraniad, gellir eu tyfu mewn cyfrwng HAT.tyfu.
18. Gyda dyfnhau ymchwil, gelwir y genhedlaeth gyntaf o wrthgyrff (gwrthgyrff polyclonaidd), yr ail genhedlaeth (gwrthgyrff monoclonaidd), a'r drydedd genhedlaeth (gwrthgyrff peirianneg genetig).
19. Ar hyn o bryd, mae peirianneg genetig firysau pryfed yn canolbwyntio'n bennaf ar bacwlovirws, a amlygir wrth gyflwyno (genyn tocsin alldarddol);(genynnau sy'n amharu ar gylchred bywyd arferol pryfed);(addasu genynnau firws).
20. Y ffactorau protein traws-weithredol sy'n cyfateb i'r elfennau cyffredin TATA, GC, a CAAT yn y hyrwyddwr mamalaidd RNA polymeras II yw (TFIID), (SP-1) a (CTF/NF1), yn y drefn honno.
dau ddeg un.Ffactorau trawsgrifio sylfaenol RNA polymerase Ⅱ yw, TFⅡ-A, TFⅡ-B, TFII-D, TFⅡ-E, a'u dilyniant rhwymol yw: (D, A, B, E).Lle mae swyddogaeth TFII-D (yn rhwymo i flwch TATA).
dau ar hugain.Mae'r rhan fwyaf o'r ffactorau trawsgrifio sy'n rhwymo i DNA yn gweithio ar ffurf dimers.Mae parthau swyddogaethol ffactorau trawsgrifio sy'n rhwymo i DNA yn gyffredin fel a ganlyn (helix-turn-helix), (motiff bys sinc), (sylfaenol-leucine) motiff zipper).
dau ddeg tri.Mae yna dri math o foddau holltiad endonuclease cyfyngu: (torri ar ochr 5 'yr echelin cymesuredd i gynhyrchu pennau gludiog 5'), (torri ar ochr 3 'yr echelin cymesuredd i gynhyrchu pennau gludiog 3' (torri ar yr echelin cymesuredd i gynhyrchu segmentau gwastad) ).
dau ddeg pedwar.Mae gan DNA Plasmid dri chyfluniad gwahanol: (cyfluniad SC), (cyfluniad oc), (cyfluniad L).Y cyntaf mewn electrofforesis yw (cyfluniad SC).
25. Systemau mynegiant genynnau alldarddol, yn bennaf (Escherichia coli), (Burum), (Pryfaid) a (tabl celloedd mamalaidd).
26. Y dulliau a ddefnyddir yn gyffredin ar gyfer anifeiliaid trawsenynnol yw: (dull heintiad ôl-feirysol), (dull micro-bigiad DNA), (dull bôn-gelloedd embryonig).
Cymhwysiad Bioleg foleciwlaidd
1. Enwch ffwythiannau mwy na 5 RNA?
Trosglwyddo RNA tRNA Trosglwyddo asid amino Ribosom RNA rRNA Ribosom yw negesydd RNA mRNA Templed synthesis protein RNA niwclear heterogenaidd RNA hnRNA Rhagflaenydd mRNA aeddfed RNA niwclear bach RNA snRNA Yn ymwneud â hnRNA splicing RNA cytoplasmig bach scRNA/7SL-RNA protein plasma reticwlwm-leoliad a chydrannau syntheseiddio signal RRNAme adnabyddiad genyn RNAsaidd RNA gweithredol enzymatically
2. Beth yw'r prif wahaniaeth rhwng hyrwyddwyr procaryotig ac ewcaryotig?
Procaryotig TTGACA --- TATAAT ------ Safle Cychwyn-35 -10 Gwelliant Ewcaryotig ---GC --- CAAT----TATAA-5mGpp-Safle Cychwyn-110 -70 -25
3. Beth yw prif agweddau adeiladu artiffisial plasmidau naturiol?
Yn aml mae gan plasmidau naturiol ddiffygion, felly nid ydynt yn addas i'w defnyddio fel cludwyr ar gyfer peirianneg enetig, a rhaid eu haddasu a'u hadeiladu: a.Ychwanegu genynnau marcio dethol addas, megis dau neu fwy, sy'n hawdd eu defnyddio ar gyfer dethol, fel arfer genynnau gwrthfiotig.b.Cynyddu neu leihau safleoedd torri ensymau addas i hwyluso ailgyfuno.c.Byrhau'r hyd, torri darnau diangen i ffwrdd, gwella effeithlonrwydd mewnforio a chynyddu'r gallu llwytho.d.Newidiwch y replicon, o dynn i rydd, o lai o gopïau i fwy o gopïau.e.Ychwanegu elfennau genetig arbennig yn unol â gofynion arbennig peirianneg enetig
4. Rhowch enghraifft o ddull ar gyfer sgrinio gwahaniaethol cDNA meinwe-benodol?
Mae poblogaethau dwy gell yn cael eu paratoi, mae'r genyn targed yn cael ei fynegi neu ei fynegi'n fawr yn un o'r celloedd, ac nid yw'r genyn targed yn cael ei fynegi na'i fynegi'n isel yn y gell arall, ac yna mae'r genyn targed yn cael ei ddarganfod trwy hybrideiddio a chymharu.Er enghraifft, yn ystod datblygiad a datblygiad tiwmorau, bydd celloedd tiwmor yn cyflwyno mRNAs â lefelau mynegiant gwahanol na chelloedd arferol.Felly, gellir sgrinio genynnau sy'n gysylltiedig â thiwmor trwy hybrideiddio gwahaniaethol.Gellir defnyddio'r dull sefydlu hefyd i sgrinio'r genynnau y mae eu mynegiant yn cael ei ysgogi.
5. Cynhyrchu a sgrinio llinellau celloedd hybridoma?
Celloedd dueg B + celloedd myeloma, ychwanegu polyethylen glycol (PEG) i hyrwyddo ymasiad celloedd, ac mae'r celloedd ymasiad splenic B-myeloma a dyfir mewn cyfrwng HAT (sy'n cynnwys hypoxanthine, aminopterin, T) yn parhau i ehangu maeth.Mae ymasiad y gell yn cynnwys: celloedd ymasiad dueg-spleen: methu â thyfu, ni ellir meithrin celloedd dueg in vitro.Celloedd ymasiad asgwrn-asgwrn: ni allant ddefnyddio hypoxanthine, ond gallant syntheseiddio purin trwy'r ail lwybr gan ddefnyddio ffolad reductase.Mae aminopterin yn atal ffolad reductase ac felly ni all dyfu.Celloedd ymasiad asgwrn-spleen: gallant dyfu mewn HAT, gall celloedd dueg ddefnyddio hypoxantine, ac mae celloedd esgyrn yn darparu swyddogaeth cellraniad.
6. Beth yw'r egwyddor a'r dull o bennu adeiledd sylfaenol DNA trwy'r dull terfynu terfynell dideoxy (dull Sanger)?
Yr egwyddor yw defnyddio terfynydd cadwyn niwcleotid—2,,3,-dideoxynucleotid i derfynu estyniad DNA.Gan nad oes ganddo'r 3-OH sy'n ofynnol ar gyfer ffurfio bondiau 3/5/ffosphodiester, unwaith y'i hymgorfforir yn y gadwyn DNA, ni ellir ymestyn y gadwyn DNA ymhellach.Yn ôl yr egwyddor o baru sylfaen, pryd bynnag y bydd DNA polymeras angen dNMP i gymryd rhan yn y gadwyn DNA estynedig fel arfer, mae dau bosibilrwydd, un yw cymryd rhan mewn ddNTP, sy'n arwain at derfynu estyniad cadwyn deoxynucleotide;y llall yw cymryd rhan yn dNTP , fel y gall y gadwyn DNA barhau i ymestyn hyd nes y caiff y ddNTP nesaf ei ymgorffori.Yn ôl y dull hwn, gellir cael grŵp o ddarnau DNA o wahanol hyd sy'n gorffen mewn ddNTP.Y dull yw rhannu'n bedwar grŵp yn y drefn honno ddAMP, ddGMP, ddCMP, a ddTMP.Ar ôl yr adwaith, gall electrofforesis gel polyacrylamid ddarllen y dilyniant DNA yn ôl y bandiau nofio.
7. Beth yw effaith rheoleiddio cadarnhaol protein activator (CAP) ar drawsgrifio?
Protein derbynnydd adenylate cylchol (cAMP) CRP (protein derbynnydd cAMP), gelwir y cymhleth a ffurfiwyd gan y cyfuniad o cAMP a CRP yn CAP (protein cAMPactivated).Pan dyfir E. coli mewn cyfrwng sy'n brin o glwcos, mae synthesis y PAC yn cynyddu, ac mae gan PAC y swyddogaeth o ysgogi hyrwyddwyr megis lactos (Lac).Nid oes gan rai hyrwyddwyr CRP-ddibynnol y nodwedd dilyniant rhanbarth -35 nodweddiadol (TTGACA) sydd gan hyrwyddwyr cyffredin.Felly, mae'n anodd i RNA polymeras glymu iddo.Mae presenoldeb PAC (swyddogaeth): gall wella'n sylweddol y cysonyn rhwymol o ensym a hyrwyddwr.Mae'n dangos y ddwy agwedd ganlynol yn bennaf: ① Mae PAC yn helpu'r moleciwl ensym i gyfeiriadu'n gywir trwy newid cydffurfiad yr hyrwyddwr a'r rhyngweithio â'r ensym, er mwyn cyfuno â'r rhanbarth -10 a chwarae rôl disodli swyddogaeth y rhanbarth -35.Gall ②CAP hefyd atal rhwymo RNA polymeras i safleoedd eraill mewn DNA, a thrwy hynny gynyddu'r tebygolrwydd o rwymo i'w hyrwyddwr penodol.
8. Pa gamau sydd fel arfer yn cael eu cynnwys mewn arbrawf ailgyfuno DNA nodweddiadol?
a.Tynnwch genyn targed (neu enyn alldarddol) yr organeb sy'n rhoi, a'i gysylltu'n ensymatig â moleciwl DNA arall (fector clonio) i ffurfio moleciwl DNA ailgyfunol newydd.b.Trosglwyddwch y moleciwl DNA ailgyfunol i'r gell dderbyn a'i ddyblygu a'i gadw yn y gell derbyn.Gelwir y broses hon yn drawsnewid.c.Sgrinio ac adnabod y celloedd derbyn hynny sydd wedi amsugno'r DNA ailgyfunol.d.Meithrin màs y celloedd sy'n cynnwys y DNA ailgyfunol i ganfod a yw'r genyn cymorth tramor yn cael ei fynegi.
9. Adeiladu llyfrgell genynnau Rhoddir tri dull ar gyfer sgrinio ailgyfuniadau a disgrifir y broses yn fyr.
Sgrinio ymwrthedd i wrthfiotigau, anactifadu ymwrthedd mewnosodol, sgrinio smotyn glas-gwyn neu sgrinio PCR, sgrinio gwahaniaethol, chwiliwr DNA Mae'r rhan fwyaf o fectorau clonio yn cario genynnau ymwrthedd gwrthfiotig (gwrth-ampicillin, tetracycline).Pan fydd y plasmid yn cael ei drosglwyddo i Escherichia coli, bydd y bacteria yn caffael ymwrthedd, ac ni fydd gan y rhai sydd heb drosglwyddo ymwrthedd.Ond ni all wahaniaethu a yw wedi'i ad-drefnu ai peidio.Mewn fector sy'n cynnwys dau enyn gwrthiant, os yw darn DNA tramor yn cael ei fewnosod yn un o'r genynnau ac yn achosi i'r genyn gael ei anactifadu, gellir defnyddio dau reolydd plât sy'n cynnwys gwahanol gyffuriau i sgrinio ar gyfer ailgyfuniadau positif.Er enghraifft, mae'r plasmid pUC yn cynnwys y genyn LacZ (amgodio β-galactosidase), a all ddadelfennu'r swbstrad cromogenig X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indole-β-D-galactosidase) i gynhyrchu glas, a thrwy hynny droi'r straen yn las.Pan fewnosodir y DNA tramor, ni ellir mynegi'r genyn LacZ, ac mae'r straen yn wyn, er mwyn sgrinio'r bacteria ailgyfunol.
10. Eglurwch y broses sylfaenol o gael anifeiliaid trawsgenig trwy fôn-gelloedd embryonig?
Mae bôn-gelloedd embryonig (ES) yn gelloedd embryonig yn ystod datblygiad embryonig, y gellir eu meithrin yn artiffisial a'u lluosogi ac sydd â'r swyddogaeth o wahaniaethu i fathau eraill o gelloedd.Diwylliant celloedd ES: Mae màs celloedd mewnol y blastocyst yn ynysig ac yn ddiwylliedig.Pan fydd ES yn cael ei feithrin mewn haen heb ei fwydo, bydd yn gwahaniaethu i gelloedd swyddogaethol amrywiol megis celloedd cyhyrau a chelloedd N.Pan gaiff ei feithrin mewn cyfrwng sy'n cynnwys ffibroblastau, bydd ES yn cynnal y swyddogaeth wahaniaethu.Gellir trin ES yn enetig, a gellir integreiddio ei swyddogaeth wahaniaethu heb effeithio ar ei swyddogaeth wahaniaethu, sy'n datrys problem integreiddio ar hap.Cyflwyno genynnau alldarddol i fôn-gelloedd embryonig, yna mewnblannu i groth llygod benywaidd beichiog, datblygu'n loi bach, a chroesi i gael llygod homosygaidd.
