Mae gwrthgyrff, a elwir hefyd yn imiwnoglobwlinau (Ig), yn glycoproteinau sy'n rhwymo'n benodol i antigenau.
 
Cynhyrchir paratoi gwrthgyrff confensiynol trwy imiwneiddio anifeiliaid a chasglu antiserum.Felly, mae antiserwm fel arfer yn cynnwys gwrthgyrff yn erbyn antigenau digyswllt eraill a chydrannau protein eraill yn y serwm.Mae moleciwlau antigen cyffredinol yn bennaf yn cynnwys nifer o epitopau gwahanol, felly mae gwrthgyrff confensiynol hefyd yn gymysgedd o wrthgyrff yn erbyn nifer o epitopau gwahanol.Mae hyd yn oed y gwrthgyrff serwm confensiynol a gyfeirir yn erbyn yr un epitope yn dal i fod yn cynnwys gwrthgyrff heterogenaidd a gynhyrchir gan wahanol glonau celloedd B.Felly, gelwir gwrthgyrff serwm confensiynol hefyd yn wrthgyrff polyclonaidd, neu'n wrthgyrff polyclonaidd yn fyr.
 
Mae gwrthgorff monoclonaidd (gwrthgorff monoclonaidd) yn wrthgorff hynod unffurf a gynhyrchir gan glôn cell B sengl ac wedi'i gyfeirio yn erbyn epitop penodol yn unig.Fe'i paratoir fel arfer gan dechnoleg hybridoma - mae technoleg gwrthgyrff hybridoma yn seiliedig ar dechnoleg ymasiad celloedd, gan gyfuno celloedd B â'r gallu i secretu gwrthgyrff penodol a chelloedd myeloma â chynhwysedd twf anfeidrol i hybridomas celloedd B.Mae gan y gell hybridoma hon nodweddion rhiant-gell.Gall amlhau am gyfnod amhenodol ac anfarwol in vitro fel celloedd myeloma, a gall syntheseiddio a secretu gwrthgyrff penodol fel lymffocytau splenig.Trwy glonio, gellir cael llinell monoclonaidd sy'n deillio o un gell hybridoma, hynny yw, llinell gell hybridoma.Mae'r gwrthgyrff y mae'n eu cynhyrchu yn wrthgyrff hynod homogenaidd yn erbyn yr un penderfynydd antigenig, hynny yw, gwrthgyrff monoclonaidd.
 
Mae gwrthgyrff yn bodoli fel un neu fwy o fonomerau siâp Y (hy, gwrthgyrff monoclonaidd neu wrthgyrff polyclonaidd).Mae pob monomer siâp Y yn cynnwys 4 cadwyn polypeptid, gan gynnwys dwy gadwyn drwm union yr un fath a dwy gadwyn golau union yr un fath.Mae cadwyn ysgafn a chadwyn trwm yn cael eu henwi yn ôl eu pwysau moleciwlaidd.Brig y strwythur siâp Y yw'r rhanbarth newidiol, sef y safle rhwymo antigen.(Dyfyniad o Detai Bio-Monoclonal Antibody Concept)
 
Strwythur gwrthgyrff
Cadwyn drom
Mae pum math o gadwyni trwm Ig mamalaidd, a enwir gyda'r llythrennau Groeg α, δ, ε, γ, a μ.Gelwir y gwrthgyrff cyfatebol yn IgA, IgD, IgE, IgG, ac IgM.Mae cadwyni trwm gwahanol yn wahanol o ran maint a chyfansoddiad.Mae α a γ yn cynnwys tua 450 o asidau amino, tra bod μ a ε yn cynnwys tua 550 o asidau amino.
Mae gan bob cadwyn trwm ddau ranbarth: y rhanbarth cyson a'r rhanbarth amrywiol.Mae gan bob gwrthgyrff o'r un math yr un rhanbarth cyson, ond mae gwahaniaethau rhwng gwrthgyrff o wahanol fathau.Mae rhanbarthau cyson y cadwyni trwm γ, α, a δ yn cynnwys tri pharth Ig ar y cyd, gyda rhanbarth colfach i gynyddu ei hyblygrwydd;mae rhanbarthau cyson y cadwyni trwm μ a ε yn cynnwys parth 4 Ig.Mae rhanbarth amrywiol cadwyn trwm y gwrthgorff a gynhyrchir gan wahanol gelloedd B yn wahanol, ond mae rhanbarth amrywiol y gwrthgorff a gynhyrchir gan yr un cell B neu'r un clôn cell yr un peth, ac mae rhanbarth amrywiol pob cadwyn drwm tua 110 o hyd asidau amino., A ffurfio parth Ig unigol.
 
Cadwyn ysgafn
Dim ond dau fath o gadwynau ysgafn sydd mewn mamaliaid: math lambda a math kappa.Mae gan bob cadwyn ysgafn ddau barth cysylltiedig: rhanbarth cyson a rhanbarth amrywiol.Mae hyd y gadwyn ysgafn tua 211 ~ 217 o asidau amino.Mae'r ddwy gadwyn ysgafn sydd ym mhob gwrthgorff yr un peth bob amser.Ar gyfer mamaliaid, dim ond un math sydd gan y gadwyn ysgafn ym mhob gwrthgorff: kappa neu lambda.Mewn rhai fertebratau is, fel pysgod cartilaginous (pysgod cartilag) a physgod esgyrnog, mae mathau eraill o gadwyni ysgafn fel y math iota (iota) hefyd i'w cael.
 
segmentau Fab a Fc
Gellir cyfuno'r segment Fc yn uniongyrchol ag ensymau neu liwiau fflwroleuol i labelu gwrthgyrff.Dyma'r rhan lle mae'r gwrthgorff yn rhybedu ar y plât yn ystod y broses ELISA, a dyma'r rhan hefyd lle mae'r ail wrthgorff yn cael ei gydnabod a'i rwymo mewn imiwnodiad, imiwnoblotio ac imiwn-histocemeg.Gellir hydrolysu gwrthgyrff yn ddau segment F(ab) ac un segment Fc gan ensymau proteolytig fel papain, neu gallant gael eu torri o'r rhanbarth colfach gan pepsin a'u hydrolysu yn un segment F(ab)2 ac un segment Fc.Mae darnau gwrthgorff IgG weithiau'n ddefnyddiol iawn.Oherwydd diffyg y segment Fc, ni fydd y segment F(ab) yn gwaddodi gyda'r antigen, ac ni fydd yn cael ei ddal gan gelloedd imiwnedd mewn astudiaethau in vivo.Oherwydd y darnau moleciwlaidd bach a diffyg swyddogaeth trawsgysylltu (oherwydd diffyg segment Fc), defnyddir y segment Fab fel arfer ar gyfer radiolabelu mewn astudiaethau swyddogaethol, a defnyddir y segment Fc yn bennaf fel asiant blocio mewn staenio histocemegol.
 
Rhanbarthau amrywiol a chyson
Mae'r rhanbarth newidiol (rhanbarth V) wedi'i leoli ar 1/5 neu 1/4 (yn cynnwys tua 118 o weddillion asid amino) o'r gadwyn H ger y derfynfa N ac 1/2 (yn cynnwys tua 108-111 o weddillion asid amino) ger terfynell N y gadwyn L.Mae gan bob rhanbarth V fodrwy peptid a ffurfiwyd gan fondiau disulfide o fewn y gadwyn, ac mae pob cylch peptid yn cynnwys tua 67 i 75 o weddillion asid amino.Mae cyfansoddiad a threfniant asidau amino yn y rhanbarth V yn pennu penodoldeb rhwymo antigen y gwrthgorff.Oherwydd y mathau a'r dilyniant o asidau amino sy'n newid yn barhaus yn y rhanbarth V, gellir ffurfio sawl math o wrthgyrff gyda gwahanol fanylebau antigen rhwymol.Gelwir rhanbarthau V y gadwyn L a'r gadwyn H yn VL a VH, yn y drefn honno.Yn VL a VH, mae gan gyfansoddiad a dilyniant asid amino rhai rhanbarthau lleol raddfa uwch o amrywiad.Gelwir y rhanbarthau hyn yn rhanbarthau gor-amrywiol (HVR).Mae cyfansoddiad a threfniant asid amino y rhannau nad ydynt yn HVR yn y rhanbarth V yn gymharol geidwadol, a elwir yn rhanbarth fframwaith.Mae tri rhanbarth gor-amrywiol yn VL, sydd fel arfer wedi'u lleoli ar weddillion asid amino 24 i 34 ac 89 i 97 yn y drefn honno.Gelwir y tri HVR o VL a VH yn HVR1, HVR2 a HVR3, yn y drefn honno.Profodd ymchwil a dadansoddiad diffreithiant grisial pelydr-X mai'r rhanbarth gor-amrywiol yn wir yw'r man lle mae'r antigen gwrthgorff yn rhwymo, felly fe'i gelwir yn rhanbarth pennu cyfatebolrwydd (CDR).Gellir galw HVR1, HVR2 a HVR3 VL a VH yn CDR1, CDR2 a CDR3 yn y drefn honno.Yn gyffredinol, mae gan CDR3 lefel uwch o or-amrywioldeb.Y rhanbarth gor-amrywiol hefyd yw'r prif leoliad lle mae penderfynyddion idiotypic moleciwlau Ig yn bodoli.Yn y rhan fwyaf o achosion, mae'r gadwyn H yn chwarae rhan bwysicach wrth rwymo'r antigen.
Y rhanbarth cyson (rhanbarth C)wedi'i leoli ar 3/4 neu 4/5 (oddeutu o asid amino 119 i derfynell C) y gadwyn H ger y derfynfa C ac 1/2 (yn cynnwys tua 105 o weddillion asid amino) ger terfynell C y gadwyn L.Mae pob rhanbarth swyddogaethol o'r gadwyn H yn cynnwys tua 110 o weddillion asid amino, ac mae'n cynnwys cylch peptid sy'n cynnwys 50-60 o weddillion asid amino wedi'u cysylltu gan fondiau disulfide.Mae cyfansoddiad a threfniant asid amino y rhanbarth hwn yn gymharol gyson yn yr un gadwyn anifail Ig isotype L a'r un gadwyn math H.Yr un peth, dim ond yn benodol y gall rwymo'r antigen cyfatebol, ond mae strwythur ei ranbarth C yr un peth, hynny yw, mae ganddo'r un antigenicity.Gellir cyfuno'r gwrthgorff eilaidd IgG gwrth-ddynol ceffyl (neu wrth-gwrthgorff) â'r ddau Mae cyfuniad o wrthgyrff (IgG) yn erbyn gwahanol ecsotocsinau yn digwydd.Mae hon yn sail bwysig ar gyfer paratoi gwrthgyrff eilaidd a chymhwyso fflworoleuedd, isotopau, ensymau a gwrthgyrff eraill sydd wedi'u labelu.
 
 
Cynhyrchion Cysylltiedig:
Pecyn Cell Uniongyrchol RT-qPCR