Mae RNase yn air sensitif nad yw llawer o fyfyrwyr sy'n aml yn cynnal arbrofion echdynnu RNA eisiau ei glywed.Wedi'i arfogi'n llawn, diraddiwyd yr RNA a echdynnwyd o'r diwedd gyda'r adweithyddion hynod wenwynig ffenol a chlorofform.Nid wyf yn cymodi!!!Heddiw, gadewch i ni edrych ar darddiad yr enwog Rnase.

Mae ribonuclease (RNase), neu RNase, yn niwcleas sy'n gallu hydrolysio RNA yn foleciwlau bach.Mae RNase, fel protein moleciwl bach, yn anarferol o sefydlog .Ni all sterileiddio stêm tymheredd uchel confensiynol a phwysedd uchel ac atalyddion protein ei anactifadu'n llwyr.Daw sefydlogrwydd RNase yn bennaf o'r bondiau disulfide yn y strwythur.Er enghraifft, dim ond 124 o asidau amino sydd gan yr RNase a ddefnyddir yn gyffredin mewn pancreas buchol, ond mae'n cynnwys 4 bond disulfide.Mae bond sylffwr a bond disulfide yn rhoi sefydlogrwydd thermol rhagorol i RNase.Yn ogystal, mae gan rnase bwysau moleciwlaidd cymharol fach a gall adfer ei gydffurfiad gwreiddiol yn gyflym mewn llawer o achosion.

Yn ogystal â bod yn hynod sefydlog,Mae RNases yn hollbresennol yn y labordy .Mae RNase yn fecanwaith amddiffyn biolegol.Ar gyfer cell, mae RNA alldarddol yn aml yn angheuol.O'i gymharu â DNA alldarddol, mae RNA alldarddol yn aml yn fwy peryglus.Mae RNA yn cael ei drawsgrifio a'i gyfieithu'n hapus, felly mae bron pob organeb wedi datblygu RNases i amddiffyn rhag goresgyniad RNA alldarddol.Felly, mae'r celloedd bacteriol sy'n cael eu tyfu yn y labordy a chi sy'n echdynnu RNA yn amlygu arogl RNase.Mae hylifau'r corff dynol (poer, dagrau, ac ati) yn cynnwys llawer iawn o RNase, felly peidiwch â chrio pan fydd RNA wedi'i ddiraddio.Po fwyaf y byddwch chi'n crio, y gwaethaf yw'r diraddiad RNA!!Nid yw Sister Daiyu yn addas ar gyfer echdynnu RNA!

Yn ogystal, mae eich croen cain hefyd yn cynnwys llawer o RNase, ac mae'r marcwyr, pibedau, drysau oergell, a dolenni drysau sydd wedi'u cyffwrdd gan y croen hefyd yn cynnwys RNase.

Gyda chymaint o grwydro, gadewch i ni edrych ar sut i ddelio â RNases.

Y peth cyntaf y mae pawb yn meddwl amdano wrth ddileu RNA ywDEPC(pyrocarbonad diethyl).Mae DEPC yn dadnatureiddio'r protein yn bennaf trwy gyfuno â chylch imidazole y grŵp gweithredol RNase histidine, a thrwy hynny atal gweithgaredd yr ensym.Gall 0.1% DEPC gael gwell effaith dynnu ar Rnase, ond mae angen inni dalu sylw bod DEPC yn garsinogen hysbys, felly dylid rhoi sylw arbennig wrth ei ddefnyddio.

Ar gyfer RNase, mae angen i ni ddechrau o ddwy agwedd,y cyntaf yw atal gweithgaredd RNase mewndarddol

Gall adweithyddion echdynnu RNA confensiynol fel isothiocyanate guanidine a DTT a gynhwysir yn Trizol agor bond disulfide RNase, ond mae rhai RNases o hyd, yn enwedig mewn samplau meinwe, felly rhowch sylw i dymheredd isel.

1 .Trochwch y sampl meinwe yn syth mewn nitrogen hylifol ar ôl ei dynnu allan, neu mewn hydoddiant cadw RNA masnachol.

2 .Ar ôl echdynnu RNA y sampl cell, ychwanegwch ef at yr hydoddiant lysis a'i lysio ar y blwch iâ

3. Mae'n well defnyddio nitrogen hylifol ar gyfer malu pan fydd samplau meinwe yn cael eu homogeneiddio.Wrth ddefnyddio homogenizer trydan heb nitrogen hylifol, rhowch sylw i rag-oeri'r addasydd homogenate yn llawn.

Yr ail yw DNA alldarddol

1 .Byddwch yn arfog, gwisgwch gôt labordy, gwisgwch fwgwd, a gwnewch yn siŵr eich bod chi'n gwisgo pâr o fenig newydd (peidiwch â bod mor ddarbodus! Dylid nodi bod Trizol yn hynod gyrydol, ac mae hefyd yn gryf iawn trwy fenig, felly peidiwch â diferu ar eich dwylo).

2 .Rhaid i'r holl awgrymiadau pibed a ddefnyddir, tiwbiau EP, tiwbiau PCR ac offer arall gael eu dad-RNase.Gellir ei socian mewn 0.1% DEPC ac yna ei wasgu dan bwysau uchel.Rhowch sylw i'r llawdriniaeth mewn cwfl mygdarth.Gall gormeswyr lleol brynu nwyddau traul yn uniongyrchol ar gyfer tynnu ensymau.

PS: Gadewch imi ddweud wrthych ddull diog.Er na all tymheredd uchel a phwysedd uchel gael gwared ar RNase yn llwyr, bydd yn tynnu rhan fawr ohono.Mae 2 waith o dymheredd uchel a gwasgedd uchel yn cael effaith dda, ac nid yw echdynnu RNA yn cael fawr o effaith.

3.Gall alcohol ddadnatureiddio proteinau,felly gellir sychu'r tabl echdynnu RNA gyda 75% o alcohol , a gellir chwistrellu menig ag alcohol hefyd.

4.Dylai'r hydoddiant hydoddi RNA terfynol a'r tiwb centrifuge hefyd gael eu trin â dad-RNase.Mae dŵr DEPC yn doddiant hydoddi RNA a ddefnyddir yn gyffredin.Gadewch i ni siarad am y dull paratoi cywir o ddŵr DEPC (cofiwch ail-becynnu'r DEPC masnachol pan fyddwch chi'n ei brynu)

Ychwanegu DEPC at ddŵr pur iawn ar 1:1000, ysgwyd yn dda, gadael i sefyll dros nos ar 37 ° C, a sterileiddio ar 121 ° C o dan dymheredd uchel a gwasgedd uchel am 15 munud.Gellir storio dŵr DEPC ar -20 ° C mewn aliquots 1ml.

Yn olaf, i grynhoi: tymheredd isel yw'r allwedd, caiff nwyddau traul eu trin yn dda, eu harfogi'n llawn a llai o siarad!

Wel, dyna ni ar gyfer strategaeth heddiw.Rwy'n dymuno'r holl grynodiad a phurdeb RNA y soniasoch amdanynt.Mae'r ddwy A260 / A280 yn 2.0!!!

Wrth gwrs, os ydych yn defnyddio atymheredd ystafell gweithrediad pecyn echdynnu RNA, efallai na fyddwch yn dod ar draws y trafferthion uchod.

Mae gweithredu ar dymheredd ystafell, heb ychwanegu DNase, yn tynnu cyfanswm RNA o gelloedd mewn 11 munud, ac yn tynnu cyfanswm RNA o feinweoedd anifeiliaid neu blanhigion mewn 30 munud.

Ar gyfer samplau prawf, cysylltwch â:overseas@foregene.com

Cynhyrchion Cysylltiedig:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/