Cwestiynau Cyffredin ar gyferPecyn Ynysu RNA Cyfanswm Anifeiliaid

Mae'r dadansoddiad canlynol o'r problemau y gallech ddod ar eu trawsmeinwe anifeiliaid / echdynnu RNA celloedd will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

Nid yw RNA yn cael ei dynnu neu mae cynnyrch RNA yn isel

Yn aml mae yna amrywiaeth o ffactorau sy'n effeithio ar effeithlonrwydd adferiad, megis: cynnwys RNA sampl meinwe, dull gweithredu, cyfaint elution, ac ati.

1. Perfformiwyd centrifugation bath iâ neu cryogenig (4 °C) yn ystod y llawdriniaeth.

Argymhelliad: Gweithredu ar dymheredd ystafell (15-25 ° C) trwy gydol y broses gyfan, peidiwch â bath iâ a centrifuge ar dymheredd isel.

2. Cadw sampl yn amhriodol neu amser storio sampl gormodol.

Argymhelliad: Storio samplau ar -80 ° C neu eu rhewi mewn nitrogen hylifol ac osgoi defnydd rhewi-dadmer dro ar ôl tro;ceisio defnyddio meinwe ffres neu gelloedd diwylliedig ar gyfer echdynnu RNA.

3. lysis sampl annigonol.

Argymhelliad: Wrth homogeneiddio meinwe, sicrhewch fod y meinwe wedi'i homogeneiddio'n ddigonol a bod y celloedd meinwe wedi'u hollti'n ddigonol i egluro rhyddhau RNA.

4. Ni ychwanegir yr eluent yn gywir.

Argymhelliad: Cadarnhau bod ddH Di-RNase₂Ychwanegir O dropwise i ganol y bilen colofn puro.

5. Ni ychwanegwyd cyfaint cywir ethanol absoliwt at Buffer RL2 na Buffer RW2.

Argymhelliad: Dilynwch y cyfarwyddiadau, ychwanegwch y cyfaint cywir o ethanol absoliwt i Buffer RL2 a Buffer RW2 a chymysgwch yn dda cyn defnyddio'r pecyn.

6. Nid yw dos sampl meinwe yn briodol.

Argymhelliad: Defnyddiwch 10-20 mg o feinwe neu (1-5) × 10⁶celloedd fesul 500 μl byffer RL1, gan y gall defnydd gormodol o feinwe arwain at lai o echdynnu RNA.

7. Cyfaint elution amhriodol neu elution anghyflawn.

Argymhelliad: Cyfrol elution y golofn puro yw 50-200 μl;os nad yw'r effaith elution yn foddhaol, argymhellir ymestyn yr amser lleoli tymheredd ystafell ar ôl ychwanegu ddH heb RNase wedi'i gynhesu ymlaen llaw₂O, ee am 5-10 munud.

8.Mae gan y golofn puro weddillion ethanol ar ôl golchi Buffer RW2.

Argymhelliad: Os oes gweddillion ethanol ar ôl golchi Buffer RW2, centrifugio tiwb gwag am 1 munud, gellir cynyddu'r amser ar gyfer gweithrediad centrifugation tiwb gwag i 2min, neu gellir gosod y golofn puro ar dymheredd ystafell am 5 munud i gael gwared ar yr ethanol gweddilliol yn ddigonol.

Mae RNA wedi'i buro yn cael ei ddiraddio

Mae ansawdd yr RNA wedi'i buro yn gysylltiedig â ffactorau megis cadw'r sampl, halogiad RNase, a thrin, ac ati.

1. Ni chedwir samplau meinwe mewn pryd.

Argymhelliad: Os na ddefnyddir samplau meinwe neu gelloedd mewn modd amserol ar ôl eu casglu, ar unwaith cryopreserve ar -80 ° C neu nitrogen hylifol.I echdynnu RNA, defnyddiwch feinwe sydd newydd ei gymryd neu sampl o gelloedd pryd bynnag y bo modd.

2. Rhewi-dadmer dro ar ôl tro o samplau meinwe.

Argymhelliad: Wrth storio samplau meinwe, mae'n well eu torri'n ddarnau bach i'w cadw, a thynnu un o'r darnau wrth eu defnyddio i osgoi rhewi-dadmer dro ar ôl tro o'r sampl a diraddio RNA.

3. Mae RNase yn cael ei gyflwyno neu beidio â gwisgo menig tafladwy, masgiau, ac ati yn ystod y llawdriniaeth.

Argymhelliad: Mae arbrofion echdynnu RNA yn cael eu perfformio orau mewn ystafelloedd trin RNA ar wahân a bod y bwrdd yn cael ei glirio cyn yr arbrawf.

Gwisgwch fenig a masgiau tafladwy yn ystod yr arbrawf i leihau dirywiad RNA a achosir gan gyflwyniad RNase.

4. Mae adweithyddion wedi'u halogi â RNase yn ystod y defnydd.

Argymhelliad: Gosod Pecyn Ynysu RNA Cyfanswm Anifeiliaid newydd yn ei le ar gyfer arbrofion cysylltiedig.

5. Mae'r tiwbiau centrifuge, awgrymiadau, ac ati a ddefnyddir mewn trin RNA wedi'u halogi â RNase.

Argymhelliad: Cadarnhewch fod y tiwbiau centrifuge, y tomenni, y pibedau, ac ati a ddefnyddir i echdynnu RNA i gyd yn rhydd o RNase.

Mae RNA a gafwyd wedi'i buro yn effeithio ar arbrofion i lawr yr afon

RNA puro gan y golofn puro, os yw'r ïonau halen, bydd cynnwys protein yn rhy fawr yn effeithio ar yr arbrawf i lawr yr afon, megis: trawsgrifio gwrthdro, Northern Blot et al.

1. Mae gan yr RNA eliwiedig weddillion ïon halen.

Argymhelliad: Cadarnhau bod y cyfaint cywir o ethanol wedi'i ychwanegu at Buffer RW2 a pherfformio 2 olchi colofn puro ar y cyflymder allgyrchol a nodir ar gyfer gweithredu;os oes unrhyw weddillion ïon halen, gadewch y golofn puro i Buffer RW2 am 5 munud ar dymheredd yr ystafell a pherfformio centrifugio i gael gwared â halogiad halen i'r eithaf.

2. Gweddillion ethanol mewn RNA elutioned.

Argymhelliad: Cadarnhau, ar ôl golchi byffer RW2, cyflawni'r llawdriniaeth centrifugation tiwb gwag ar y cyflymder centrifugation a nodir ar gyfer gweithredu, cynyddu amser gweithrediad centrifugation tiwb gwag i 2 funud os oes gweddillion ethanol o hyd, neu ei adael ar dymheredd ystafell am 5 munud ar ôl y centrifugation tiwb gwag i wneud y mwyaf o gael gwared ar weddillion ethanol.

Ynysu mathau sampl asid nulceig

Gall pecynnau ynysu RNA Foregene gael ynysu / echdynnu RNA yn gyfan gwbl o'r ffynonellau sampl canlynol: Meinwe anifeiliaid, planhigyn, celloedd, firaol, gwaed, ac ati.

Sut ydw i'n storio'r cit

Storio tymheredd ystafell am 24 mis.