Nodwedd ragorol yr adwaith PCR yw ei allu ymhelaethu mawr a sensitifrwydd uchel iawn.Er mwyn gwella perfformiad PCR ac effeithlonrwydd canfod, rydym wedi ymrwymo i wella gallu ymhelaethu PCR a sensitifrwydd canfod, ond mae'r cur pen yn y broses o'r arbrawf.Mae positifau ffug yn aml yn digwydd, a gall ychydig iawn o groeshalogi sampl neu halogiad cynnyrch PCR achosi positifau ffug yn yr arbrawf.
Pum math o halogiad cynnyrch PCR
Mae yna lawer o resymau dros halogiad PCR, y gellir eu rhannu'n fras i'r categorïau canlynol:
Mae halogiad sbesimen yn cael ei achosi'n bennaf gan halogiad y cynhwysydd ar gyfer casglu'r sbesimen, neu pan osodir y sbesimen, caiff ei ollwng allan o'r cynhwysydd oherwydd selio rhydd, neu cedwir y sbesimen i'r tu allan i'r cynhwysydd, sy'n achosi croeshalogi;Mae halogiad yn arwain at halogiad rhwng sbesimenau;gall rhai sbesimenau microbaidd, yn enwedig firysau, ledaenu ag aerosolau neu ffurfio aerosolau, gan arwain at halogiad cilyddol.
Y prif reswm yw, wrth baratoi adweithyddion PCR, bod y gwn sampl, y cynhwysydd, y dŵr distylliedig dwbl ac atebion eraill wedi'u halogi gan y templed asid niwclëig PCR.
Mewn labordai bioleg moleciwlaidd a rhai labordai sy'n defnyddio plasmidau wedi'u clonio fel rheolaethau cadarnhaol, mae problem halogiad plasmid wedi'i glonio hefyd yn gyffredin.Oherwydd bod cynnwys clonio plasmid mewn cyfaint uned yn eithaf uchel, ac mae angen mwy o offer ac adweithyddion yn y broses buro, ac mae'r plasmid mewn celloedd byw yn debygol iawn o gael ei halogi oherwydd twf cryf a gallu atgenhedlu celloedd byw.
Halogiad cynhyrchion chwyddedig yw'r broblem halogi fwyaf cyffredin mewn adweithiau PCR.Oherwydd bod maint copi cynnyrch PCR yn fawr (yn gyffredinol 1013 copi / ml), sy'n llawer uwch na therfyn nifer copi canfod PCR, gall ychydig iawn o halogiad cynnyrch PCR achosi positifau ffug.
Llygredd aerosol yw'r math mwyaf tebygol o halogi cynhyrchion PCR, a dyma'r ffordd hawsaf i'w hanwybyddu hefyd.Mae'n cael ei ffurfio gan y ffrithiant rhwng yr arwyneb hylif a'r aer.Yn gyffredinol, gellir ffurfio halogiad aerosol pan agorir y caead, pan fydd y sampl yn cael ei allsugno, neu hyd yn oed pan fydd y tiwb adwaith yn cael ei ysgwyd yn egnïol.Yn ôl cyfrifiadau, gall gronyn aerosol gynnwys 48,000 o gopïau, felly mae'r llygredd a achosir ganddo yn broblem sy'n haeddu sylw arbennig.
Yn benodol, mae labordai profi yn aml yn defnyddio'r un pâr o preimwyr i brofi genyn penodol.Dros amser, bydd llawer iawn o halogiad cynnyrch PCR yn digwydd yn y gofod labordy.Unwaith y bydd halogiad o'r fath yn digwydd, mae'n anodd ei ddileu mewn amser byr.
Ar gyfer y tri math cyntaf o lygredd, gallwn ddefnyddio dulliau effeithiol i osgoi, ond mae'r llygredd a achosir gan gynhyrchion PCR yn anodd ei atal, yn enwedig wrth adeiladu labordai PCR ansafonol.Yn y broses PCR, pan fydd tip y pibed yn sugno ac yn chwythu'r hylif, a gorchudd y tiwb PCR yn cael ei agor, bydd aerosol yn cael ei ffurfio.Mae'r moleciwlau DNA sy'n cael eu cludo gan yr aerosol (gall un aerosol gario degau o filoedd o DNA) yn anodd eu dileu oherwydd eu bod yn arnofio yn yr awyr.Unwaith y bydd y rownd nesaf o arbrofion PCR yn cael eu cyflwyno, mae'n anochel y bydd positifau ffug yn digwydd.
Fel y dangosir yn y ffigur isod, roedd y rheolaeth negyddol hefyd yn ymhelaethu ar y band diddordeb cyfatebol:
Cyflwynir rhan gyntaf y rhifyn hwn o lygredd PCR ac atal yma.Bydd y rhifyn nesaf yn dod â'r ail ran i chi "Atal halogiad cynnyrch PCR", felly cadwch draw!
Amser post: Gorff-25-2017
