• facebook
  • yn gysylltiedig
  • youtube

Colli clyw (HL) yw'r clefyd anabledd synhwyraidd mwyaf cyffredin mewn pobl.Mewn gwledydd datblygedig, mae tua 80% o achosion o fyddardod cynieithog mewn plant yn cael eu hachosi gan ffactorau genetig.Y rhai mwyaf cyffredin yw namau un genyn (fel y dangosir yn Ffig. 1), canfuwyd bod 124 o fwtaniadau genynnol yn gysylltiedig â cholled clyw ansyndromig mewn pobl, mae'r gweddill yn cael eu hachosi gan ffactorau amgylcheddol.Mewnblaniad cochlear (dyfais electronig a osodir yn y glust fewnol sy'n darparu ysgogiad trydanol yn uniongyrchol i'r nerf clywedol) yw'r opsiwn mwyaf effeithiol o bell ffordd ar gyfer trin HL difrifol, tra gall cymorth clyw (dyfais electronig allanol sy'n trosi ac yn chwyddo tonnau sain) helpu Cleifion â HL cymedrol.Fodd bynnag, nid oes unrhyw gyffuriau ar gael ar hyn o bryd i drin HL etifeddol.Yn ystod y blynyddoedd diwethaf, mae therapi genynnau wedi cael sylw cynyddol fel dull addawol o drin camweithrediad y glust fewnol.

agrws (1)

Ffig1.Dosbarthiad math amrywiad sy'n gysylltiedig â byddardod.[1]

Yn ddiweddar, cyhoeddodd gwyddonwyr o Sefydliad Salk a Phrifysgol Sheffield ganlyniad ymchwil yn Molecular Therapy - Methods & Clinical Development [2], a ddangosodd ragolygon cymhwyso eang ar gyfer therapi genynnau in vivo ar gyfer byddardod etifeddol.Dywedodd Uri Manor, athro ymchwil cynorthwyol yn Sefydliad Salk a chyfarwyddwr Canolfan Waitt ar gyfer Bioffotoneg Uwch, iddo gael ei eni â cholled clyw difrifol a theimlai y byddai adfer clyw yn anrheg wych.Canfu ei ymchwil flaenorol fod Eps8 yn brotein rheoleiddio actin gyda gweithgareddau rhwymo a chapio actin;mewn celloedd gwallt cochlear, mae'r cymhleth protein a ffurfiwyd gan Eps8 gyda MYO15A, WHIRLIN, GPSM2 a GNAI3 yn bodoli'n bennaf yn y rhan fwyaf Mae angen awgrymiadau stereocilia hir, sydd ynghyd â MYO15A yn lleoleiddio BAIAP2L2 ar flaenau stereocilia byrrach, ar gyfer cynnal bwndeli gwallt.Felly, gall Eps8 reoleiddio hyd y stereocilia o gelloedd gwallt, sy'n hanfodol ar gyfer swyddogaeth clyw arferol;Bydd dileu neu dreiglad Eps8 yn arwain at stereocilia byr, sy'n ei gwneud yn analluog i drawsnewid sain yn signalau trydanol ar gyfer canfyddiad yr ymennydd, sydd yn ei dro yn arwain at fyddardod..Ar yr un pryd, canfu'r cydweithiwr Walter Marcotti, athro ym Mhrifysgol Sheffield, na all celloedd gwallt ddatblygu'n normal yn absenoldeb Eps8.Yn yr astudiaeth hon, ymunodd Manor a Marcotti i ymchwilio i weld a allai ychwanegu Eps8 at gelloedd ystrydebol adfer eu swyddogaeth ac, yn ei dro, wella clyw mewn llygod.Defnyddiodd y tîm ymchwil y fector firws adeno-gysylltiedig (AAV) Anc80L65 i gyflwyno'r dilyniant codio sy'n cynnwys math gwyllt EPS8 i mewn i cochlea llygod P1-P2 newydd-anedig Eps8-/- trwy chwistrelliad pilen ffenestr gron;mewn celloedd gwallt cochlear llygoden Atgyweiriwyd swyddogaeth stereocilia cyn iddynt aeddfedu;a nodweddwyd yr effaith atgyweirio gan dechnoleg delweddu a mesur stereocilia.Dangosodd y canlyniadau fod Eps8 wedi cynyddu hyd stereocilia ac wedi adfer swyddogaeth celloedd blew mewn celloedd amledd isel.Canfuwyd hefyd bod y celloedd, dros amser, fel pe baent yn colli eu gallu i gael eu hachub gan y therapi genynnol hwn.Y goblygiad yw y gallai fod angen rhoi'r driniaeth hon yn y groth, oherwydd gall celloedd gwallt Eps8-/- fod wedi aeddfedu neu gronni difrod y tu hwnt i'w hatgyweirio ar ôl i'r llygod gael eu geni.“Mae Eps8 yn brotein gyda llawer o wahanol swyddogaethau, ac mae llawer i'w archwilio o hyd,” meddai Manor.Bydd ymchwil yn y dyfodol yn cynnwys ymchwilio i effaith therapi genynnol Eps8 ar adfer clyw ar wahanol gamau datblygiadol, ac a oes modd ymestyn cyfleoedd triniaeth.Trwy gyd-ddigwyddiad, ym mis Tachwedd 2020, cyhoeddodd yr Athro KarenB Avraham o Brifysgol Tel Aviv yn Israel ei ganlyniadau yn y cyfnodolyn EMBO Molecular Medicine [3], gan ddefnyddio technoleg therapi genynnol arloesol i greu firws synthetig diniwed cysylltiedig ag adeno AAV9-PHP.B, Atgyweiriwyd y diffyg genynnol yng nghelloedd gwallt llygod Syne4-/- trwy chwistrellu firws sy'n cario dilyniant codio Syne4 i mewn i glust fewnol llygod, gan ganiatáu iddo fynd i mewn i'r celloedd gwallt a rhyddhau'r deunydd genetig a gludir, gan ganiatáu iddynt aeddfedu a gweithredu'n normal (fel yn Ffig. 2).

agrws (2)

Ffig2.Cynrychiolaeth sgematig o anatomeg y glust fewnol, gyda ffocws ar theorgan Corti a swyddogaeth gellog nesprin-4.

Gellir gweld bod y defnydd o therapi genynnol i gyflawni'r diben o drin clefydau etifeddol ar lefel genynnau trwy fewnosod, dileu neu gywiro unrhyw enynnau treigledig ar gyfer triniaeth (hynny yw, rheoli newidiadau genetig yn y clefyd) yn cael effaith glinigol uchel.rhagolygon cais.Gellir rhannu'r dulliau therapi genynnau presennol ar gyfer byddardod â diffyg genetig yn y categorïau canlynol:

amnewid genyn

Gellir dadlau mai amnewid genynnau yw’r ffurf fwyaf “syml” o therapi genynnau, yn seiliedig ar adnabod ac amnewid genyn diffygiol gyda chopi arferol neu fath gwyllt o’r genyn.Astudiaeth therapi genynnau clust fewnol lwyddiannus gyntaf ar gyfer colli clyw a achosir gan ddileu'r genyn cludwr glwtamad pothellog 3 (VGLUT3);Cyflwyno gorfynegiant VGLUT3 alldarddol wedi'i gyfryngu gan AAV1 yng nghelloedd gwallt y glust fewnol (IHCs) Gall arwain at adferiad clyw parhaus, adferiad morffoleg synaptig rhuban rhannol, ac ymatebion dirdynnol [4].Fodd bynnag, yn yr enghreifftiau sy'n cynnwys y ddau amnewidiad genyn a ddarperir gan AAV a ddisgrifir yn y cyflwyniad uchod, mae'n bwysig nodi bod y modelau llygoden a ddefnyddir ar gyfer rhai mathau o anhwylderau colli clyw etifeddol dileu genynnau yn wahanol dros dro i bobl, ac mewn llygod P1 , mae'r glust fewnol yn y cyfnod aeddfed o ddatblygiad.Mewn cyferbyniad, mae bodau dynol yn cael eu geni â chlust fewnol aeddfed.Mae'r gwahaniaeth hwn yn atal y posibilrwydd o gymhwyso canlyniadau'r llygoden i drin anhwylderau byddardod etifeddol dynol oni bai bod therapi genynnol yn cael ei roi i glustiau aeddfed y llygoden.

Golygu Genynnau: CRISPR/Cas9

O'i gymharu â "adnewyddu genynnau", mae datblygiad technoleg golygu genynnau wedi dod â gwawr trin clefydau genetig o'r gwraidd.Yn bwysig, mae'r dull golygu genynnau yn gwneud iawn am ddiffygion dulliau therapi genynnau gorfynegiant traddodiadol nad ydynt yn addas ar gyfer clefydau byddardod etifeddol dominyddol, a'r broblem nad yw'r dull gorfynegiant yn para'n hir.Ar ôl i ymchwilwyr Tsieineaidd fwrw allan yn benodol yr alel mutant Myo6C442Y mewn llygod Myo6WT/C442Y gan ddefnyddio system golygu genynnau AAV-SaCas9-KKH-Myo6-g2, ac o fewn 5 mis i'r canlyniad, llygod adferwyd swyddogaeth glywedol y model;ar yr un pryd, sylwyd hefyd bod cyfradd goroesi celloedd gwallt yn y glust fewnol wedi'i wella, daeth siâp y cilia yn rheolaidd, a chywirwyd y dangosyddion electroffisiolegol [5].Dyma’r astudiaeth gyntaf yn y byd i ddefnyddio technoleg CRISPR/Cas9 ar gyfer trin byddardod etifeddol a achosir gan dreiglad genynnau Myo6, ac mae’n gynnydd ymchwil pwysig o dechnoleg golygu genynnau ar gyfer trin byddardod etifeddol.Mae'r cyfieithiad clinigol o driniaeth yn darparu sylfaen wyddonol gadarn.

Dulliau cyflwyno therapi genynnau

Er mwyn i therapi genynnau fod yn llwyddiannus, ni all moleciwlau DNA noeth dreiddio i gelloedd yn effeithiol oherwydd eu hydrophilicity a gwefr negyddol grwpiau ffosffad, ac er mwyn sicrhau cywirdeb y moleciwlau asid niwclëig atodol, rhaid dewis dull diogel ac effeithiol.Mae'r DNA atodol yn cael ei ddosbarthu i'r gell neu'r feinwe darged.Defnyddir AAV yn eang fel cyfrwng dosbarthu ar gyfer trin clefydau oherwydd ei effaith heintus uchel, imiwnogenigrwydd isel, a tropiaeth eang i wahanol fathau o feinwe.Ar hyn o bryd, mae corff mawr o waith ymchwil wedi pennu tropiaeth gwahanol isdeipiau o AAV o'i gymharu â gwahanol fathau o gelloedd yn cochlea'r llygoden.Gall defnyddio nodweddion cyflwyno AAV ynghyd â hyrwyddwyr cell-benodol gyflawni mynegiant cell-benodol, a all leihau effeithiau oddi ar y targed.Yn ogystal, fel dewis arall i fectorau AAV traddodiadol, mae fectorau AAV synthetig newydd yn cael eu datblygu'n gyson ac yn dangos gallu trawsgludo uwch yn y glust fewnol, ac AAV2 / Anc80L65 yw'r un a ddefnyddir amlaf.Gellir rhannu dulliau cyflwyno nad ydynt yn firaol ymhellach yn ddulliau ffisegol (micrinjection ac electroporation) a dulliau cemegol (seiliedig ar lipid, seiliedig ar bolymer, a nanoronynnau aur).Defnyddiwyd y ddau ddull wrth drin anhwylderau byddardod etifeddol ac maent wedi dangos manteision a chyfyngiadau gwahanol.Yn ogystal â'r cyfrwng dosbarthu ar gyfer therapi genynnau fel cyfrwng, gellir defnyddio gwahanol ddulliau o weinyddu genynnau in vivo yn seiliedig ar wahanol fathau o gelloedd targed, llwybrau gweinyddu, ac effeithiolrwydd therapiwtig.Mae strwythur cymhleth y glust fewnol yn ei gwneud hi'n anodd cyrraedd celloedd targed ac mae dosbarthiad asiantau golygu genom yn araf.Mae'r labyrinth pilenog wedi'i leoli o fewn labyrinth esgyrnog yr asgwrn tymhorol ac mae'n cynnwys dwythell y cochlea, dwythell hanner cylch, utricle, a balŵn.Mae ei arwahanrwydd cymharol, y cylchrediad lymffatig lleiaf posibl, a'i wahanu oddi wrth y gwaed gan rwystr drysfa gwaed yn cyfyngu ar y broses systemig o gyflwyno therapiwteg i lygod newyddenedigol yn unig.Er mwyn cael titers firaol sy'n addas ar gyfer therapi genynnau, mae angen chwistrelliad lleol uniongyrchol o fectorau firaol i'r glust fewnol.Mae llwybrau chwistrellu sefydledig yn cynnwys [6]: (1) pilen ffenestr gron (RWM), (2) traceostomi, (3) cochleostomi endolymphatic neu perilymffatig, (4) pilen ffenestr gron ynghyd â ffenestri tiwb (CF) (fel yn Ffig. 3).

agrws (3)

Ffig3.Cyflwyno therapi genynnol yn y glust fewnol.

Er bod llawer o ddatblygiadau wedi'u gwneud mewn therapi genynnau, yn seiliedig ar nodau trosiadol clinigol, mae angen gwneud mwy o waith cyn y gall therapi genynnol ddod yn opsiwn triniaeth rheng flaen i gleifion â chlefydau genetig, yn enwedig wrth ddatblygu fectorau a dull cyflwyno diogel ac effeithiol.Ond credwn yn y dyfodol agos y bydd y mathau hyn o driniaethau yn dod yn rhan annatod o therapi personoledig ac yn cael effaith hynod gadarnhaol ar fywydau pobl ag anhwylderau genetig a'u teuluoedd.

Mae Foregene hefyd wedi lansio pecyn sgrinio trwybwn uchel ar gyfer genynnau wedi'u targedu, sy'n gyflym ac yn gallu perfformio trawsgrifio gwrthdro ac adweithiau qPCR heb echdynnu RNA.

Cysylltiadau Cynnyrch

Pecyn Cell Uniongyrchol RT-qPCR - Taqman/SYBR GWYRDD I

Am ragor o wybodaeth am y cynnyrch, cysylltwch â:

overseas@foregene.com


Amser postio: Medi-02-2022