Mae nifer o ddyfeisiadau chwyldroadol yn hanes technoleg canfod yn fy meddwl i yn dechnoleg imiwn-labelu yn seiliedig ar yr egwyddor o rwymo antigen-gwrthgyrff penodol, technoleg PCR a thechnoleg dilyniannu.Heddiw byddwn yn siarad am dechnoleg PCR.Yn ôl esblygiad technoleg PCR, mae pobl fel arfer yn rhannu technoleg PCR yn dair cenhedlaeth: technoleg PCR cyffredin, technoleg PCR meintiol amser real a thechnoleg PCR digidol.
Ctechneg PCR ommon
KARY MULLIS (1944.12.28-2019.8.7)
Dyfeisiodd Kary Mullis yr adwaith cadwyn polymeras (adwaith cadwyn polymeras, PCR) ym 1983. Dywedir pan oedd yn gyrru ei gariad, yn sydyn cafodd fflach o ysbrydoliaeth a meddwl am egwyddor PCR (ar fanteision gyrru).Dyfarnwyd Gwobr Nobel mewn Cemeg i Kary Mullis ym 1993. Dywedodd y New York Times: “Gwreiddiol iawn ac arwyddocaol, bron yn rhannu bioleg i gyfnodau cyn-PCR ac ôl-PCR.
Egwyddor PCR: O dan gatalysis DNA polymeras, defnyddir DNA llinyn y fam fel y templed, a defnyddir y paent preimio penodol fel man cychwyn yr estyniad, ac mae DNA llinyn y ferch sy'n cyd-fynd â thempled llinyn y fam yn cael ei gopïo'n in vitro trwy ddadnatureiddio, anelio, ymestyn a chamau eraill.Mae'n dechnoleg ymhelaethu synthesis DNA in vitro, sy'n gallu chwyddo unrhyw DNA targed in vitro yn gyflym ac yn benodol.
Manteision PCR cyffredin
1.Dull clasurol, safonau rhyngwladol a domestig cyflawn
2.Cost is o adweithyddion offeryn
3.Gellir adennill cynhyrchion PCR ar gyfer arbrofion bioleg moleciwlaidd eraill
Peiriant PCR Foregene a Argymhellir: https://www.foreivd.com/foreamp-sn-695-series-thermal-cycler-96-wells-pcr-machine-product/
Cynhyrchion cysylltiedig: https://www.foreivd.com/pcr-herotm-with-dye-product/
Anfanteision PCR cyffredin
1.hawdd ei lygru
2.gweithrediad feichus
3.dadansoddiad ansoddol yn unig
4.Sensitifrwydd cymedrol
5.Mae ymhelaethiad amhenodol, a phan fo'r band amhenodol yr un maint â'r band targed, ni ellir ei wahaniaethu
CPCR seiliedig ar electrofforesis apilari
Mewn ymateb i ddiffygion PCR cyffredin, mae rhai gweithgynhyrchwyr wedi cyflwyno offerynnau yn seiliedig ar yr egwyddor o electrofforesis capilari.Mae'r cam electrofforesis ar ôl ymhelaethiad PCR wedi'i gwblhau yn y capilari.Mae'r sensitifrwydd yn uwch, a gellir gwahaniaethu rhwng y gwahaniaeth o sawl sylfaen a gellir cyfrifo'r ymhelaethiad gan MAERKER.cynnwys cynnyrch.Yr anfantais yw bod angen agor y cynnyrch PCR o hyd a'i roi yn yr offeryn, ac mae risg fawr o halogiad o hyd.
CapillaryElectrophoresis
2. Technoleg PCR meintiol fflwroleuol amser real (PCR Meintiol amser real, qPCR)Mae PCR meintiol fflwroleuol, a elwir hefyd yn Real-Time PCR, yn dechnoleg feintiol asid niwclëig newydd a ddatblygwyd gan PE (Perkin Elmer) ym 1995. Mae hanes datblygu PCR meintiol fflwroleuol yn hanes o frwydrau calonogol cewri fel ABI, Roche, a Bio-Rad.Os oes gennych ddiddordeb, gallwch edrych arno.Ar hyn o bryd, y dechneg hon yw'r dechneg PCR lled-feintiol fwyaf aeddfed a ddefnyddir yn eang.
Peiriant qPCR a Argymhellir: https://www.foreivd.com/mini-real-time-pcr-system-forequant-sf2sf4-product/
Dull llifyn fflwroleuol (SYBR Green I):SYBR Gwyrdd I yw'r llifyn rhwymo DNA a ddefnyddir amlaf ar gyfer PCR meintiol, sy'n clymu'n amhenodol i DNA llinyn dwbl.Yn y cyflwr rhydd, mae SYBR Green yn allyrru fflworoleuedd gwan, ond unwaith yn rhwym i DNA llinyn dwbl, mae ei fflworoleuedd yn cynyddu 1000-plyg.Felly, mae cyfanswm y signal fflwroleuol a allyrrir gan adwaith yn gymesur â faint o DNA llinyn dwbl sy'n bresennol a bydd yn cynyddu gyda chynnydd cynnyrch chwyddedig.Gan fod y llifyn yn clymu'n amhenodol i DNA dwy-sownd, mae'n bosibl y bydd canlyniadau positif ffug yn cael eu cynhyrchu.
Cynhyrchion cysylltiedig: https://www.foreivd.com/real-time-pcr-easytm-sybr-green-i-kit-product/
Dull stiliwr fflwroleuol (technoleg Taqman): Yn ystodYmhelaethiad PCR, ychwanegir stiliwr fflwroleuol penodol ar yr un pryd â phâr o preimwyr.Mae'r stiliwr yn oligonucleotid llinol, gyda grŵp o adroddwyr fflwroleuol a grŵp diffodd fflwroleuol wedi'u labelu ar y ddau ben yn y drefn honno.Pan fydd y stiliwr yn gyfan, mae'r signal fflwroleuol a allyrrir gan y grŵp adroddwr yn cael ei amsugno gan y grŵp quencher, a'r canfod Nid oes signal fflwroleuol;yn ystod ymhelaethu PCR (yn y cam ymestyn), bydd gweithgaredd Dicer 5'-3' o ensym Taq yn treulio ac yn diraddio'r chwiliedydd, fel bod y grŵp fflworoleuol gohebydd a'r grŵp fflwroleuol quencher yn cael eu gwahanu, fel bod y system monitro fflworoleuedd Gellir derbyn y signal fflwroleuol, hynny yw, bob tro y caiff cadwyn DNA ei chwyddo, mae'r signal fflworoleuol yn cael ei chwyddo, sy'n gwireddu'r signal fflworoleuol cyfan, sy'n gwireddu'r signal fflworoleuol cyfan. s a ffurfio cynhyrchion PCR.Dull stiliwr Taqman yw'r dull canfod a ddefnyddir amlaf mewn canfod clinigol.
Cynhyrchion cysylltiedig: https://www.foreivd.com/quickeasy%e1%b5%80%e1%b4%b9-real-time-pcr-kit-taqman-product/
Manteision qPCR
1.Mae'r dull yn aeddfed ac mae'r offer ategol a'r adweithyddion wedi'u cwblhau
2.Cost ganolig adweithyddion
3.hawdd i'w defnyddio
4.Sensitifrwydd canfod uchel a phenodoldeb
Anfanteision qPCR
Mae treiglad y genyn targed yn arwain at fethu canfod.
Ni ellir pennu canlyniad canfod templed crynodiad isel.
Mae gwall mawr wrth ddefnyddio'r gromlin safonol ar gyfer canfod meintiol.
3. Technoleg PCR digidol (PCR digidol, dPCR).
Mae PCR digidol yn dechneg ar gyfer meintioli absoliwt moleciwlau asid niwclëig.O'i gymharu â qPCR, gall PCR digidol ddarllen nifer y moleciwlau DNA/RNA yn uniongyrchol, sef meintioliad absoliwt moleciwlau asid niwclëig yn y sampl gychwynnol.Ym 1999, cynigiodd Bert Vogelstein a Kenneth W. Kin-zler y cysyniad o dPCR yn ffurfiol.
Yn 2006, Fluidigm oedd y cyntaf i gynhyrchu offeryn dPCR masnachol yn seiliedig ar sglodion.Yn 2009, lansiodd Life Technologies systemau OpenArray a QuantStudio 12K Flex dPCR.Yn 2013, lansiodd Life Technologies y system QuantStudio 3DdPCR, sy'n defnyddio technoleg sglodion microhylif nanoraddfa dwysedd uchel i ddosbarthu samplau yn gyfartal i 20,000 o gelloedd unigol.yn yr adwaith yn dda.
Yn 2011, lansiodd Bio-Rad yr offeryn QX100 dPCR seiliedig ar ddefnynnau, sy'n defnyddio technoleg dŵr-mewn-olew i ddosbarthu'r sampl yn gyfartal i 20,000 o ddefnynnau dŵr-mewn-olew, ac yn defnyddio dadansoddwr defnynnau i ddadansoddi'r defnynnau.Yn 2012, lansiodd RainDance yr offeryn dPCR RainDrop, wedi'i yrru gan nwy pwysedd uchel, i rannu pob system adwaith safonol yn emwlsiwn adwaith sy'n cynnwys 1 miliwn i 10 miliwn o ficro-ddefnynnau lefel picoliter.
Hyd yn hyn, mae PCR digidol wedi ffurfio dwy garfan fawr, math sglodion a math defnyn.Ni waeth pa fath o PCR digidol, ei egwyddorion craidd yw cyfyngu ar wanhau, PCR endpoint a dosbarthiad Poisson.Mae'r system adwaith PCR safonol sy'n cynnwys templedi asid niwclëig wedi'i rhannu'n gyfartal yn ddegau o filoedd o adweithiau PCR, sy'n cael eu dosbarthu i sglodion neu ficrodroplets, fel bod pob adwaith yn cynnwys cymaint â phosibl o foleciwl templed, ac mae adwaith PCR templed un moleciwl yn cael ei berfformio.Trwy ddarllen y fflworoleuedd Mae presenoldeb neu absenoldeb y signal yn cael ei gyfrif, ac mae'r meintioliad absoliwt yn cael ei berfformio ar ôl graddnodi dosbarthiad ystadegol Poisson.
Mae'r canlynol yn nodweddion sawl platfform PCR digidol yr wyf wedi'u defnyddio:
1. Bio-Rad QX200 droplet digidol PCR Bio-RadMae QX200 yn blatfform PCR digidol clasurol iawn, y broses ganfod sylfaenol: mae 20,000 o samplau yn cael eu cynhyrchu gan y generadur defnynnau Mae micro-ddefnynnau dŵr-mewn-olew yn cael eu chwyddo ar beiriant PCR cyffredin, ac yn olaf mae signal fflworoleuedd pob micro-ddefnyn yn cael ei ddarllen gan ddarllenydd micro-ddefnyn.Mae'r llawdriniaeth yn fwy cymhleth, ac mae'r risg o lygredd yn ganolig.
PCR digidol micro-ddefnyn Xinyi TD1Mae Xinyi TD1 yn blatfform PCR digidol domestig, y broses ganfod sylfaenol: cynhyrchu 30,000-50,000 o ddefnynnau dŵr-mewn-olew trwy generadur defnyn, ymhelaethu ar offeryn PCR cyffredin, ac yn olaf pasio Mae'r darllenydd defnyn yn darllen signal fflwroleuol pob defnyn.Mae cynhyrchu defnynnau a darllen yn y platfform hwn yn cael eu perfformio mewn sglodyn pwrpasol sydd â risg isel o halogiad.
STILLA Naica micro-droplet sglodion PCR digidolMae STILLA Naica yn blatfform PCR digidol cymharol newydd.Y broses ganfod sylfaenol yw: ychwanegu'r ateb adwaith i'r sglodyn, rhoi'r sglodion yn y system cynhyrchu micro-ddefnyn a mwyhau, a chynhyrchu 30,000 o ficro-ddefnynnau.Lledaenu ar y sglodion, a chwblheir ymhelaethiad PCR ar y sglodion.Yna trosglwyddir y sglodyn chwyddedig i'r system dadansoddi darllen micro-droplet, a darllenir y signal fflwroleuol trwy dynnu lluniau.Gan fod y broses gyfan yn digwydd mewn sglodyn caeedig, mae'r risg o halogiad yn isel.
4. ThermoFisher QuantStudio PCR digidol sglodion 3D
ThermoFisher Mae QuantStudio 3D yn blatfform PCR digidol clasurol arall sy'n seiliedig ar sglodion.Ei broses ganfod sylfaenol yw: ychwanegu'r ateb adwaith i'r gwasgarwr, a lledaenu'r ateb adwaith yn gyfartal ar y sglodion gyda 20,000 o microwells trwy'r gwasgarwr., rhowch y sglodion ar y peiriant PCR i ymhelaethu, ac yn olaf rhowch y sglodion i mewn i'r darllenydd a chymerwch lun i ddarllen y signal fflwroleuol.Mae'r llawdriniaeth yn gymharol gymhleth, a chynhelir y broses gyfan mewn sglodion caeedig, ac mae'r risg o halogiad yn isel.
5. JN MEDSYS PCR digidol sglodion eglurder
Mae JN MEDSYS Clarity yn blatfform PCR digidol math sglodion cymharol newydd.Ei broses ganfod sylfaenol yw: ychwanegu'r hydoddiant adwaith i'r cymhwysydd, a lledaenu'r ateb adwaith yn gyfartal ar 10,000 o diwbiau PCR sydd wedi'u gosod yn y tiwb PCR trwy'r cymhwysydd.Ar y sglodion microporous, mae'r ateb adwaith yn mynd i mewn i'r sglodion trwy weithred capilari, ac mae'r tiwb PCR gyda'r sglodyn yn cael ei roi ar y peiriant PCR i'w chwyddo, ac yn olaf mae'r sglodion yn cael ei roi yn y darllenydd i ddarllen y signal fflwroleuol trwy dynnu llun.Mae'r llawdriniaeth yn fwy cymhleth.Mae'r risg o halogiad yn isel.
Mae paramedrau pob platfform PCR digidol wedi'u crynhoi fel a ganlyn:
Dangosyddion gwerthuso'r llwyfan PCR digidol yw: nifer yr unedau hollt, nifer y sianeli fflwroleuol, cymhlethdod gweithredu a'r risg o halogiad.Ond y peth pwysicaf yw cywirdeb canfod.Un ffordd o werthuso llwyfannau PCR digidol yw defnyddio llwyfannau PCR digidol lluosog i wirio ei gilydd, a ffordd arall yw defnyddio sylweddau safonol â gwerthoedd cywir.
Manteision dPCR
1.Cyflawni meintioliad absoliwt
2.Sensitifrwydd a phenodoldeb uwch
3.Yn gallu canfod samplau copi isel
Anfanteision dPCR1. Offer drud ac adweithyddion 2. Gweithrediad cymhleth ac amser canfod hir 3. Amrediad canfod cul
Ar hyn o bryd, mae gan y tair cenhedlaeth o dechnoleg PCR eu manteision a'u hanfanteision eu hunain, ac mae gan bob un ei feysydd cymhwyso ei hun, ac nid yw'n berthynas y mae un genhedlaeth yn disodli'r llall.Mae datblygiad parhaus technoleg wedi chwistrellu bywiogrwydd newydd i dechnoleg PCR, gan ei alluogi i ddatgloi un cyfeiriad cais ar ôl y llall, gan wneud canfod asid niwclëig yn fwy cyfleus a chywir.
Ffynhonnell: Dr Yuan yn mynd â chi ar gyfer profi
Cynhyrchion a Argymhellir:
Amser postio: Tachwedd-18-2022
