• facebook
  • yn gysylltiedig
  • youtube

Awgrymiadau ar gyfer Gwella Adfer Glud

1. Cynyddu'r llwyth sampl yn ystod electrofforesis.

2. Defnyddio byffer electrofforesis wedi'i baratoi'n ffres.

3. Wrth dorri glud, ceisiwch dorri'r glud yn unig gyda stribedi i leihau cyfaint y torri glud: nid oes angen glud gydag ychydig o ddarnau pwrpas, fel arall bydd yn effeithio ar y gyfradd adennill.

4. Ar ôl toddi dau neu fwy o ddarnau o glud, defnyddiwch tiwb ni waeth pa mor fawr yw'r gyfaint a'i drosglwyddo i'r un golofn.

5. Gall yr ateb a ychwanegir yn y sol fod ychydig yn fwy, sy'n fwy ffafriol i rwymo DNA i'r bilen, ond yn gyffredinol nid ydynt yn fwy na 750ul.

6. Yr allwedd i adfer gel yw rhwymo DNA i'r golofn trwy'r crynodiad halen, asidedd (gwefr) a hydroffobigedd yr hydoddiant yn y golofn.Felly, os yw pH y byffer electrofforesis yn rhy uchel, gellir ychwanegu 10ul (pH 5.0, 3mol / L NaAC) at y sol;er mwyn rhyng-gipio moleciwlau DNA yn well ar y bilen, gellir ychwanegu 30% isopropanol i wres i'r hylif ar ôl hydoddi'r glud.

7. Cyn ychwanegu'r eluent, gadewch y golofn ar dymheredd yr ystafell am ychydig funudau (tua 10 munud) i anweddu'r ethanol yn llawn.

8. Yn olaf, ychwanegwch lai eluent i leihau'r cyfaint adfer.Yn gyffredinol, defnyddir eluent 30-50μl ar gyfer elution (dim rhy ychydig, fel arall ni fydd yn gallu gwlychu'r bilen, nad yw'n ffafriol i elution);mae'r defnynnau gorlifiad yng nghanol y bilen, i eliwtio'r DNA sydd wedi'i rwymo i'r bilen yn llawn.

9. Ar ôl ychwanegu'r eluent, gellir ei eluted mewn baddon dŵr o 55 gradd am 5 munud neu ei roi mewn baddon dŵr o 50 gradd am fwy na 10 munud, neu ei selio â parafilm ar 4 gradd dros nos, ac yna centrifuged ar gyfer adferiad y diwrnod nesaf, mae'r effaith yn dda.

10.Ychwanegwch y eluate centrifuged yn ôl i'r golofn arsugniad a'r centrifuge eto.

llun8

Dulliau a gweithdrefnau manwl ar gyfer adfer cynnyrch PCR

1. ailgylchu rwber cyffredin

Os ydych chi am adennill y glud, mae'n well defnyddio pecyn, sy'n gyfleus ac sydd â chyfradd adennill ychydig yn uwch.Os oes gwir angen i chi ei adennill â llaw, gallwch ychwanegu 3 gwaith cyfaint TE ar ôl torri'r glud.Ar ôl toddi mewn baddon dŵr, mae ffenol, ffenol / cloroform yn cael eu tynnu'n lân, ac mae ethanol yn cael ei waddodi.Dyna fe.

2. Adfer DNA o geliau pwynt toddi isel

Puro Darnau DNA Ychwanegu TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) sy'n hafal i gyfaint y gel, a'i roi mewn baddon dŵr 65°C am 5 munud i hydoddi'r gel yn llwyr.

Ar ôl iddo gael ei ddwyn i dymheredd yr ystafell, ychwanegwyd swm cyfartal o ffenol (dirlawn â TE, TE yn yr haen uchaf, a thynnwyd yr haen isaf o ffenol), a chymysgwyd y gymysgedd yn ysgafn (nid oes angen cymysgu), a'i allgyrchu ar 12,000 rpm am 3 munud.Ailadroddwch 1-2 gwaith.

Cymerwch y supernatant, ychwanegwch 0.1 cyfaint o asetad sodiwm 3mol/L (pH 5.2) a 2.5 gwaith cyfaint o ethanol absoliwt i gyflawni dyddodiad ethanol.Hydoddwch y DNA puredig gyda swm priodol o TE, mesurwch y cynnwys, a pharatowch i'w ddefnyddio (gellir ei ddefnyddio ar gyfer dadansoddi strwythur genynnau targed, paratoi stiliwr, ac ati).

3. adferiad PCR gyda phenodoldeb ymhelaethu da

Os yw penodoldeb ymhelaethiad PCR yn dda, dim ond puro ac adfer y cynnyrch PCR syml ydyw.Gallwch ychwanegu 50ug/ml proteinase K i'r cynnyrch PCR, 37 gradd am 1 awr, echdynnu unwaith gyda ffenol/clorofform, echdynnu unwaith gyda chlorofform, ac ychwanegu 0.1 cyfaint o'r uwchnatant.Cafodd yr asetad sodiwm ei adennill trwy wlybaniaeth gyda 2.5 cyfrol o ethanol absoliwt.

Cynhyrchion cysylltiedig:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/


Amser post: Medi-24-2022