Amser Real PCR Easyᵀᴹ-Taqman
Disgrifiadau Kit
Mae'r 2X Real PCR HawddTMMix-Taqman a ddarperir gan y Real Time PCR EasyTM-Mae pecyn Taqman yn system premix newydd sy'n defnyddio chwilwyr fflwroleuol penodol ar gyfer adweithiau chwyddo PCR Amser Real, a all wella penodoldeb cynnyrch a sensitifrwydd adwaith yn fawr.Darperir ROX fel llifyn rheolaeth fewnol.
2X Real PCR HawddTMMae Mix-Taqman yn cynnwys Taq DNA Polymerase, cychwyn poeth unigryw Foregene.O'i gymharu ag ensymau Taq cyffredin, mae ganddo fanteision effeithlonrwydd ymhelaethu uchel, gallu ymhelaethu penodol cryf a chyfradd diffyg cyfatebiaeth isel.Gall leihau ymhelaethu amhenodol a gwella cywirdeb PCR.
Manylebau
Amser Real PCR HawddTM-Taqman | ||||
Cyfansoddiad cit (system 20μl) | QP-01021 | QP-01022 | QP-01023 | QP-01024 |
200T | 500T | 1000T | 2000T | |
2 ×PCR go iawnHawddTMCymysgedd-Taqman | 1 ml ×2 | 1.7 ml ×3 | 1.7 ml ×6 | 1.7 ml ×12 |
20×ROX Cyfeirnod Dye | 200 μl | 0.5ml | 1 ml | 1 ml × 2 |
DNase-Rhydd ddH2O | 1.7 ml | 1.7 ml ×2 | 10 ml | 20 ml |
Icyfarwyddyd | 1 | 1 | 1 | 1 |
Nodweddion a manteision
■ Syml - Cymysgedd PCR 2X i leihau gwallau arbrofol ac amser gweithredu
■ Penodol — gall byffer wedi'i optimeiddio ac ensym Taq cychwyn poeth atal ymhelaethiad amhenodol a ffurfio pylu preimiwr
■ Sensitifrwydd uchel - yn gallu canfod copïau isel o'r templed
■ Amlochredd da - yn gydnaws â'r rhan fwyaf o offerynnau PCR meintiol amser real
Cais cit
dadansoddiad qPCR
Llif gwaith
Graffeg
Storio ac oes silff
Dylid storio'r pecyn hwn i ffwrdd o olau a dylid ei storio ar -20 ℃.Os caiff ei ddefnyddio'n aml, gellir ei storio hefyd ar 4 ℃ am gyfnod byr (10 diwrnod).
Dim signalau ymhelaethu
1.Mae'r Taq DNA Polymerase yn y pecyn yn colli ei weithgaredd oherwydd storio amhriodol neu ddod i ben y pecyn.
Argymhelliad: Cadarnhau amodau storio'r pecyn;ail-ychwanegu swm priodol o Taq DNA Polymerase i'r system PCR neu brynu Pecyn PCR Amser Real newydd ar gyfer arbrofion cysylltiedig.
2.Mae yna lawer o atalyddion Taq DNA Polymerase yn y templed DNA.
Awgrym: Ail buro'r templed neu leihau faint o dempled a ddefnyddir.
3. Nid yw'r crynodiad Mg2+ yn addas.
Argymhelliad: Crynodiad Mg2+ y2 × Real PCR Mix a ddarparwn yw 3.5mM.Fodd bynnag, ar gyfer rhai paent preimio a thempledi arbennig, gall y crynodiad Mg2+ fod yn uwch.Felly, gallwch chi ychwanegu MgCl2 yn uniongyrchol i wneud y gorau o'r crynodiad Mg2+.Argymhellir cynyddu'r Mg2+ 0.5mM bob tro ar gyfer optimeiddio.
4. Nid yw'r amodau ymhelaethu PCR yn addas, ac mae'r dilyniant neu'r crynodiad preimio yn amhriodol.
Awgrym: cadarnhau cywirdeb y dilyniant primer ac nid yw'r paent preimio wedi'i ddiraddio;os nad yw'r signal ymhelaethu yn dda, ceisiwch ostwng y tymheredd anelio ac addasu'r crynodiad preimio yn briodol.
5.Mae swm y templed yn rhy ychydig neu'n ormod.
Argymhelliad: Perfformio gwanhau graddiant llinoleiddio templed, a dewiswch y crynodiad templed gyda'r effaith PCR gorau ar gyfer arbrawf PCR Amser Real.
Mae gan NTC werth fflworoleuedd rhy uchel
Halogi 1.Reagent a achosir yn ystod gweithrediad.
Argymhelliad: Amnewid adweithyddion newydd ar gyfer arbrofion PCR Amser Real.
Digwyddodd 2.Contamination wrth baratoi'r system adwaith PCR.
Argymhelliad: Cymerwch y mesurau amddiffynnol angenrheidiol yn ystod y llawdriniaeth, megis: gwisgo menig latecs, defnyddio blaen pibed gyda hidlydd, ac ati.
3.Mae'r paent preimio wedi'i ddiraddio, a bydd diraddio'r paent preimio yn achosi mwyhad amhenodol.
Awgrym: Defnyddiwch electrofforesis SDS-PAGE i ganfod a yw'r paent preimio wedi'i ddiraddio, a rhoi paent preimio newydd yn eu lle ar gyfer arbrofion PCR Amser Real.
Dimer primer neu ymhelaethiad amhenodol
Nid yw crynodiad 1.The Mg2+ yn addas.
Argymhelliad: Crynodiad Mg2+ y 2 × Real PCR EasyTM Mix a ddarparwn yw 3.5 mM.Fodd bynnag, ar gyfer rhai paent preimio a thempledi arbennig, gall y crynodiad Mg2+ fod yn uwch.Felly, gallwch chi ychwanegu MgCl2 yn uniongyrchol i wneud y gorau o'r crynodiad Mg2+.Argymhellir cynyddu'r Mg2+ 0.5mM bob tro ar gyfer optimeiddio.
2.The PCR anelio tymheredd yn rhy isel.
Awgrym: Cynyddu tymheredd anelio PCR 1 ℃ neu 2 ℃ bob tro.
3.Mae'r cynnyrch PCR yn rhy hir.
Argymhelliad: Dylai hyd y cynnyrch PCR Amser Real fod rhwng 100-150bp, dim mwy na 500bp.
4.Mae'r paent preimio yn cael ei ddiraddio, a bydd diraddio'r paent preimio yn arwain at ymddangosiad ymhelaethu penodol.
Awgrym: Defnyddiwch electrofforesis SDS-PAGE i ganfod a yw'r paent preimio wedi'i ddiraddio, a rhoi paent preimio newydd yn eu lle ar gyfer arbrofion PCR Amser Real.
5.Mae'r system PCR yn amhriodol, neu mae'r system yn rhy fach.
Awgrym: Mae'r system adwaith PCR yn rhy fach a fydd yn achosi i'r cywirdeb canfod leihau.Mae'n well defnyddio'r system adwaith a argymhellir gan yr offeryn PCR meintiol i ail-redeg yr arbrawf PCR Amser Real.
Ailadroddadwyedd gwael o werthoedd meintiol
1.Mae'r offeryn yn camweithio.
Awgrym: Efallai y bydd gwallau rhwng pob twll PCR o'r offeryn, gan arwain at atgynhyrchu gwael wrth reoli neu ganfod tymheredd.Gwiriwch yn unol â chyfarwyddiadau'r offeryn cyfatebol.
2.Nid yw'r purdeb sampl yn dda.
Argymhelliad: Bydd samplau amhur yn arwain at atgynhyrchu gwael yr arbrawf, sy'n cynnwys purdeb y templed a'r paent preimio.Mae'n well ail-buro'r templed, ac mae'n well puro'r paent preimio trwy SDS-PAGE.
3.The paratoi system PCR a storio amser yn rhy hir.
Awgrym: Defnyddiwch y system PCR Amser Real ar gyfer arbrawf PCR yn syth ar ôl ei baratoi, a pheidiwch â'i adael o'r neilltu am gyfnod rhy hir.
4. Nid yw'r amodau ymhelaethu PCR yn addas, ac mae'r dilyniant neu'r crynodiad preimio yn amhriodol.
Awgrym: cadarnhau cywirdeb y dilyniant primer ac nid yw'r paent preimio wedi'i ddiraddio;os nad yw'r signal ymhelaethu yn dda, ceisiwch ostwng y tymheredd anelio ac addasu'r crynodiad preimio yn briodol.
5.Mae'r system PCR yn amhriodol, neu mae'r system yn rhy fach.
Awgrym: Mae'r system adwaith PCR yn rhy fach a fydd yn achosi i'r cywirdeb canfod leihau.Mae'n well defnyddio'r system adwaith a argymhellir gan yr offeryn PCR meintiol i ail-redeg yr arbrawf PCR Amser Real.