Cyflwyniad:

Mae RNA, enw gwyddonol asid riboniwcleig, ei dalfyriad yn dod o RiboNucleic Acid, yn fath o asid niwclëig a ffurfiwyd trwy gysylltu o leiaf dwsinau o riboniwcleotidau trwy fondiau ffosffodiester.

Cynsail archwilio RNA yw echdynnu Cyfanswm RNA di-lygredd, a gellir crynhoi egwyddor sylfaenol echdynnu RNA yn fras fel a ganlyn:

1. Tarfu ar y celloedd yn gyntaf

2. Yna tynnwch amhureddau macromoleciwlaidd (proteinau, lipidau, DNA, ac ati)

3. Yn olaf, mae'r RNA yn cael ei waddodi tra'n tynnu halwynau a thoddyddion organig, ac yn puro'r RNA ymhellach

Y gorffennol a'r presennol o ddull echdynnu

Y genhedlaeth gyntaf o ddull echdynnu RNA yw dull dyddodiad TRIzol (mae adweithyddion a ddefnyddir yn cynnwys isothiocyanate guanidine, ffenol, clorofform, ac ati) a ddyfeisiwyd gan dad-cu o'r enw Piotr Chomczynski a mam-gu Nicoletta Sacchi, oherwydd bod y ddyfais hon yn caniatáu echdynnu RNA yn gyflym ac yn hawdd, ers hynny dechreuodd y cynnydd mewn ymchwil RNA.

Yn ddiweddarach, gwerthodd Taid y patent hwn i Invitrogen, a hyrwyddodd Invitrogen y dull hwn i'r byd a daeth yn ddull a ddefnyddir yn eang.

Yn ddiweddarach, cafodd Invitrogen ei gaffael gan Thermo!

Cynnyrch cynrychioliadol: adweithydd TRIzol Invitrogen

Fodd bynnag, mae dull dyddodiad TRIzol yn gofyn am ddyodiad lluosog ac echdynnu RNA, ac mae'r adweithyddion a ddefnyddir yn wenwynig ac yn cymryd amser hir i weithredu.

Felly, daeth y dull puro ensym colofn ail genhedlaeth i fodolaeth, gan ddefnyddio bilen gel silica fel deunydd arsugniad asid niwclëig penodol i wneud y mwyaf o adferiad RNA yn y sampl tra'n cael gwared ar amhureddau eraill.

Mae'r dull ail genhedlaeth yn symleiddio'r llawdriniaeth ar sail perfformiad sefydlog, yn lleihau'r ffactor risg, ac yn gwella effeithlonrwydd echdynnu RNA.

Cynhyrchion cynrychioliadol: QIAGEN RNeasy a'r rhan fwyaf o gynhyrchion domestig

Fodd bynnag, mae'r dulliau cenhedlaeth gyntaf a'r ail genhedlaeth yn gofyn am ddefnyddio DNase i gael gwared ar halogiad DNA, sy'n dod â rhywfaint o anghyfleustra i arbrofion dilynol i lawr yr afon.Bydd DNA gweddilliol yn lleihau effeithlonrwydd trawsgrifio gwrthdro ac yn lleihau synthesis cDNA llinyn cyntaf, gan effeithio felly ar gywirdeb y canlyniadau.

Felly, mae'r dull echdynnu trydydd cenhedlaeth wedi'i optimeiddio ar sail yr ail genhedlaeth.Nid oes angen i'r arbrawf ychwanegu unrhyw ensymau, a gellir cael RNA yn hawdd gyda dim ond dwy golofn.

Colofn 1: Colofn Glanhau DNA i glirio DNA

Colofn 2: Colofn RNA yn unig yn arsugnu ac yn adennill RNA yn benodol

Mae gweithrediad mor syml nid yn unig yn arbed amser, ond hefyd yn hwyluso gweithrediad arbrofion i lawr yr afon!

Cynnyrch cynrychioliadol: QIAGEN RNeasy Plus aForegenecynhyrchion cyfres puro RNA

（RNeasy Plus）

（Foregene'sPlannu Pecyn Ynysu Cyfanswm RNA）

Dweud wrthych yn dawel!Mae pecyn RNA Foregene hefyd yn cyflwyno Rhwbiwr RNase hynod hawdd ei ddefnyddio, a all gael gwared ar 400μg o RNase yn llwyr ar yr wyneb solet mewn 1 munud, heb ychwanegu unrhyw sylweddau gwenwynig i'r corff dynol!

Llun1: Siart cymharu prosesau gweithredol

Gall cynhyrchion Foregene gwblhau echdynnu RNA mewn dwy gân yn unig, peidiwch â gwneud eraill yn genfigennus o gynnydd eich arbrawf!

Llun2:Ecanlyniadau arbrofol siart cymhariaeth

Y genhedlaeth gyntaf (1: TRIzol)

Yr ail genhedlaeth (2: RNeasy o QIAGEN)

Y drydedd genhedlaeth (3: RNeasy plus QIAGEN, 4: Foregene)

Llun3: graff qPCR (graff cromlin ymhelaethu)

Y genhedlaeth gyntaf (gwyrdd yn golygu TRIzol -, coch yn golygu TRIzol +)

Yr ail genhedlaeth (mae awyr las yn golygu QIAGEN RNeasy-, coch yn golygu QIAGEN RNeasy +)

Y drydedd genhedlaeth (glas yn golygu QIAGEN RNeasy plus, gwyrdd yn golygu Foregene)

(Sylwer: mae graff qPCR “-” yn nodi nad yw DNase wedi'i ychwanegu ac nad yw halogiad DNA wedi'i ddileu. Felly, mae'r CT yn uwch ac nid yw'r canlyniad yn gywir; mae "+" yn nodi bod DNase wedi'i ychwanegu a bod yr halogiad DNA wedi'i ddileu, mae'r canlyniad yn gywir)

Mae pob uwchraddiad technegol yn golygu bod gweithrediad yr arbrawf yn datblygu i gyfeiriad symlach a mwy hawdd ei ddefnyddio.

Nod Foregene yw helpu mwy o ymchwilwyr gwyddonol i arbed amser a chost arbrofol, cael canlyniadau arbrofol o ansawdd uchel, a chreu cyflawniadau ymchwil gwyddonol mwy gwerthfawr ar y cyd.