Awduron: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

Uned: Ysbyty Jiaozhou, Ysbyty Dongfang Yn Gysylltiedig â Phrifysgol Tongji

Ar hyn o bryd, y prif fath o sampl ar gyfer canfod asid niwclëig pathogen anadlol yw swab gwddf.Mae yna lawer o fathau o atebion cadw sampl a ddefnyddir yn gyffredin, ac mae angen eu rheweiddio neu eu rhewi i gyd ar gyfer cludo a storio;Mae'n anodd rheoli'r broses gyfan o dymheredd isel yn ystod y broses gasglu a chludo, ac mae'n anodd sicrhau rheolaeth ansawdd cyn profi sampl^[1-2].

Mae RNase (RNase) yn endonuclease sy'n hydrolyzes RNA, yn bennaf yn torri bondiau ffosffodiester rhwng niwcleotidau.Mae'r moleciwl RNase yn sefydlog iawn, mae bondiau disulfide yn y strwythur, ac nid yw ei weithgaredd yn gofyn am bresenoldeb cationau deufalent, felly nid yw RNase yn hawdd ei ddadnatureiddio, ac mae'n hawdd ei ailnatureiddio hyd yn oed ar ôl tymheredd uchel neu ddefnyddio dadnatureiddio.Rhennir RNases yn rhai mewndarddol ac alldarddol.Gall yr RNasau mewndarddol gael eu rhyddhau ar yr un pryd pan fydd celloedd yn rhwygo.Felly, mae dileu rôl RNases mewndarddol yn gam hanfodol iawn yn y broses echdynnu RNA.Mae RNasau alldarddol yn cael eu dosbarthu'n eang.Mae RNasau yn bodoli yn yr aer, croen dynol, gwallt a phoer, sy'n rhesymau pwysig dros ddiraddio RNA yn hawdd^[3].

Ymholiad data

Mae CANS-CL02-A009 “Cymhwyso Canllawiau Achredu Ansawdd a Chymhwysedd Labordai Meddygol ym Maes Diagnosis Moleciwlaidd” yn y gofynion technegol yn cynnig y dylid llunio safonau ansawdd dŵr priodol yn unol â'r cais;Cynwysyddion aerglos tafladwy:

RNase/Dosbarthiad

(1) RNase A

Mae ribonuclease A (RNase A), sy'n deillio o'r pancreas buchol, yn endoriboniwcleas a all ymosod yn benodol ar ddiwedd 3′ gweddillion pyrimidin ar RNA, gan dorri cytosin neu uracil a ffurfiwyd gan niwcleotidau cyfagos.Bond ffosffodiester, cynnyrch terfynol yr adwaith yw niwcleotid pyrimidine 3′ ac oligonucleotid gyda niwcleotid pyrimidine 3′ ar y diwedd.

(2) RNase T1

Mae Ribonuclease T1 (RNase T1) yn deillio o Aspergillus orjzae, mae'n gweithredu'n benodol ar y ffosffad 3′-terminal o guanin, ac mae'r safle holltiad rhwng y 3′ ffosffad o guanin a'r 5′ hydrocsyl o niwcleotidau cyfagos.Cynnyrch terfynol yr adwaith yw darnau 3′asid guanylig a oligonucleotid gydag asid 3′guanylic ar y diwedd.

(3) RNase H

Darganfuwyd Ribonuclease H (RNase H) gyntaf o feinwe thymws llo, ac mae ei genyn amgodio wedi'i glonio i Escherichia coli.Gall ddiraddio'n benodol DNA: llinynnau RNA mewn dwplecsau hybrid RNA, gan arwain at oligonucleotidau a mononucleotidau â therfynau 3′-OH a 5′-monoffosffad, ni all ddiraddio DNA neu RNA llinyn sengl neu ddwbl.

RNase

Swyddogaeth a defnydd

Gall ribonuclease gataleiddio diraddiad asid riboniwcleig (RNA) a gellir ei syntheseiddio'n artiffisial.Defnyddir eli meddyginiaethol yn topig i drin trawma a phoen yn y cymalau.Yn ôl adroddiadau, gall ribonuclease newid metaboledd celloedd gwesteiwr, atal synthesis firws, atal lledaeniad firws ffliw in vitro, ac atal ffurfio firws vaccinia a herpes mewn embryonau cyw iâr.Gall defnydd clinigol o chwistrelliad mewngyhyrol dyddiol ribonuclease o 180 mg, sy'n fuddiol i drin enseffalitis epidemig, ribonuclease gataleiddio diraddiad asid riboniwcleig (RNA), a gellir ei syntheseiddio'n artiffisial bellach.Defnyddir eli meddyginiaethol yn topig i drin trawma a phoen yn y cymalau.Yn ôl adroddiadau, gall ribonuclease newid metaboledd celloedd gwesteiwr, atal synthesis firws, atal lledaeniad firws ffliw in vitro, ac atal ffurfio firws vaccinia a herpes mewn embryonau cyw iâr.Mae defnydd clinigol o chwistrelliad mewngyhyrol dyddiol ribonuclease o 180 mg yn fuddiol ar gyfer trin enseffalitis epidemig.

RNase

Diffiniad Atalydd

Diffiniad o uned atalydd RNase: Mae maint yr ensym sydd ei angen i atal 50% o actifedd 5ng RNase A yn un uned.

Sut mae Atalyddion RNase yn Gweithio

Isthiocyanate Guanidine:

Mae Guanidine isothiocyanate yn gyfansoddyn organig gyda'r fformiwla moleciwlaidd C2H6N4S.Defnyddir yn bennaf mewn meddygaeth fiolegol, adweithyddion cemegol, ac ati. Mae Guanidine isothiocyanate yn asiant lysing protein, ac fe'i defnyddir yn aml fel prif gydran hydoddiant lysis mewn adweithyddion diagnostig moleciwlaidd.Gall lyse meinwe, dinistrio strwythur celloedd a datgysylltu asid niwclëig o niwcleoprotein, ac mae ganddo ddadnatureiddio cryf i RNase.Dyma'r atalydd RNase mwyaf effeithiol ar hyn o bryd.

Mae TRIzol yn adweithydd echdynnu RNA cyfanswm newydd sy'n gallu echdynnu cyfanswm RNA yn uniongyrchol o gelloedd neu feinweoedd.Mae'n cynnwys sylweddau fel isothiocyanate ffenol a guanidine, a all amharu'n gyflym ar gelloedd ac atal cnewyllyn a ryddheir gan gelloedd.

(Fodd bynnag, mae'r guanidine isothiocyanate yn beryglus i iechyd ymchwilwyr labordy.)

RNasin:

Glycoprotein asid wedi'i dynnu o afu llygod mawr neu blastoderm dynol.Mae Rnasin yn atalydd anghystadleuol o RNase, a all rwymo i RNases amrywiol i'w anactifadu.

(Mwy o fanylion: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Htymheredd uchel:

Mae tymheredd uchel hefyd yn ddull cyffredin o ddadnatureiddio protein.

Dietylpyrocarbonad (DEPC):

Mae DEPC yn atalydd RNase cryf ond anghyflawn, a all atal gweithgaredd RNase trwy gyfuno â chylch imidazole asid amino grŵp gweithredol RNase i ddadnatureiddio proteinau.

Cyfadeilad riboniwcleoside Vanadyl:

Cymhleth a ffurfiwyd gan ïonau vanadium ocsid a niwcleosidau, sy'n clymu i RNase ar ffurf sylweddau trawsnewidiol, a all atal gweithgaredd RNase bron yn llwyr

arall:

Mae SDS, wrea, daear diatomaceous, ac ati hefyd yn cael effaith ataliol benodol ar RNase.

Adolygiadau Arbenigol

Li Yujie Prif Dechnegydd

Cyfarwyddwr yr Adran Labordy, Ysbyty Jiaozhou, Ysbyty Dongfang Yn Gysylltiedig â Phrifysgol Tongji

Er mwyn atal bioddiraddio RNase alldarddol, dylid gwisgo masgiau, menig a hetiau yn aml yn ystod y broses echdynnu RNA.Rhaid pobi'r holl lestri gwydr mewn popty sychu ar 200°C am fwy na 2 awr.Mae angen trin deunyddiau a ddefnyddir ar gyfer pobi, fel plastig, â dŵr DEPC, ac yna eu golchi â dŵr distyll.Dylai'r adweithyddion neu'r dyfeisiau a ddefnyddir ar gyfer echdynnu, cadw ac adnabod RNA gael eu neilltuo i RNA, a dylid sefydlu ardal weithredu RNA annibynnol.

cyfeiriadau:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Bacteria a firysau yn y nasopharyncs yn union cyn i heintiau anadlol is acíwt ddechrau mewn plant brodorol Awstralia[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Cangen Rheoli Heintiau Ysbyty o Gymdeithas Meddygaeth Ataliol Tsieineaidd.Canllawiau ar gyfer casglu ac arolygu sbesimenau microbaidd clinigol [J].Cyfnodolyn Heintiau Ysbyty Tsieineaidd, 2018 (20): 3192-3200.

[3] “Prawf Clinigol Deg Mil Pam Cyfrol Prawf Bioleg Foleciwlaidd”