Mae PCR Uniongyrchol yn adwaith sy'n defnyddio meinweoedd anifeiliaid neu blanhigyn yn uniongyrchol i'w mwyhau heb echdynnu asid niwclëig.Mewn sawl ffordd, mae PCR uniongyrchol yn gweithio fel PCR rheolaidd

Y prif wahaniaeth yw'r byffer arfer a ddefnyddir mewn PCR uniongyrchol, gall y sampl fod yn destun yr adwaith PCR yn uniongyrchol heb echdynnu asid niwclëig, ond mae gofynion cyfatebol ar gyfer goddefgarwch yr ensymau a chydnawsedd y byffer sy'n gysylltiedig â'r adwaith PCR uniongyrchol.

Er bod mwy neu lai o atalyddion PCR mewn samplau cyffredin, gall PCR uniongyrchol gyflawni ymhelaethiad dibynadwy o hyd o dan weithred ensymau a byfferau.Mae'r adwaith PCR traddodiadol yn gofyn am asid niwclëig o ansawdd uchel fel templed, a all atal cynnydd llyfn adwaith PCR os yw'r templed yn cynnwys proteinau ac amhureddau eraill.Ar hyn o bryd mae PCR Uniongyrchol yn un o'r technolegau mwyaf poblogaidd ym maes diagnosteg moleciwlaidd.

01 Defnyddiwyd PCR Uniongyrchol yn wreiddiol ar gyfer anifeiliaid a phlanhigion

Mae'r defnydd cynharaf o PCR uniongyrchol ym maes anifeiliaid a phlanhigion, megis gwaed, meinwe a gwallt y llygoden fawr, cath, cyw iâr, cwningen, defaid, gwartheg, ac ati, dail planhigion a hadau, ac ati, a ddefnyddir i astudio genoteipio, trawsgenig, canfod plasmid, dadansoddi genynnau, adnabod ffynhonnell DNA, adnabod rhywogaethau, dadansoddiad PCE a meysydd eraill.

Mae gan y meysydd hyn rai nodweddion cyffredin, hynny yw, mae'r cynnwys genynnau targed yn gymharol uchel ac mae echdynnu asid niwclëig yn drafferthus, felly gall PCR uniongyrchol nid yn unig arbed amser a chael effaith fach ar y canlyniadau, ond hefyd arbed costau.

Mae PCR uniongyrchol a ddefnyddir ar gyfer canfod pathogen yn fater o'r blynyddoedd diwethaf, mae rhai gweithgynhyrchwyr adweithyddion PCR wedi gwneud llawer o ymdrechion i'r cyfeiriad hwn wrth wneud arloesedd.Yn enwedig yn yr epidemig COVID-19 hwn, mae llawer o gynhyrchion canfod o'r fath wedi ymddangos ar y farchnad, megis Pecyn Canfod Asid Niwcleig SARS-CoV-2 (Dull Archwilio Fflwroleuol Amlblecs PCR) a ymchwiliwyd ac a ddatblygwyd gan Foregene, sy'n defnyddio technoleg RT PCR amser real (rRT-PCR) ar gyfer canfod ansoddol o samplau trwynol SARS-CoV-2 neu asid niwcloffig mewn asid trwynol neu nwcleoffig swnary-2.

Mae Foregene yn un o'r cwmnïau sy'n defnyddio technoleg Direct PCR, ar gyfer canfod ORF1ab, N, E, aamrywiad llinach asidau niwclëig mewn samplau swab nasopharyngeal neu oroffaryngeal dynol megis SARS-CoV-2 B.1.1.7 llinach (DU), B.1.351 llinach (ZA), B.1.617 llinach (IND) a P.1 llinach (BR).

02  Angen adweithyddion ar gyfer PCR uniongyrchol

Sampl Lysate

Gall y lysate sampl gael ei ffurfweddu gennych chi'ch hun neu ei brynu.Bydd y gwahaniaeth yng nghyfansoddiad gwahanol frandiau o lysate yn gwneud y gallu lysing yn wahanol, ac yna bydd yr amser gorwedd ychydig yn wahanol.Er enghraifft, ar gyfer paratoi samplau meinwe anifeiliaid, argymhellir lysis 30 munud neu dros nos yn gyffredinol, ac mae'r datrysiad lysis ar gyfer firysau yn amrywio o 3-10 munud.

Prif gymysgedd PCR

Argymhellir defnyddio DNA polymeras cychwyn poeth i wella ymhelaethu penodol a chynyddu'r gallu ymhelaethu.Mae craidd PCR uniongyrchol yn bolymeras goddefgar iawn.

Dileu neu atal cydrannau yn y sampl sy'n effeithio ar ymhelaethu DNA

Ar ôl i'r sampl gael ei phrosesu gyda'r lysate, bydd proteinau, lipidau a malurion celloedd eraill yn cael eu rhyddhau, bydd y sylweddau hyn yn atal yr adwaith PCR.Felly, mae PCR uniongyrchol yn gofyn am ychwanegu tynnu cyfatebol neu atalyddion i leihau dylanwad y ffactorau hyn.

03  Casgliad o bum pwynt gwybodaeth o PCR uniongyrchol

Yn gyntaf, mae technoleg PCR Uniongyrchol yn dechnoleg PCR uniongyrchol ar gyfer samplau biolegol amrywiol.O dan y cyflwr technegol hwn, nid oes angen gwahanu a thynnu'r asid niwclëig, defnyddio'r sampl meinwe yn uniongyrchol fel gwrthrych, ac ychwanegu'r preimwyr genyn targed i berfformio'r adwaith PCR.

Yn ail, mae technoleg PCR Uniongyrchol nid yn unig yn dechnoleg ymhelaethu templed DNA traddodiadol, ond mae hefyd yn cynnwys templed RNA trawsgrifio gwrthdroi PCR.

Yn drydydd, mae technoleg PCR Uniongyrchol nid yn unig yn perfformio adweithiau PCR ansoddol arferol yn uniongyrchol ar samplau meinwe, ond hefyd yn cynnwys adweithiau qPCR Real-Time, sy'n ei gwneud yn ofynnol i'r system adwaith fod â gallu ymyrraeth fflworoleuedd gwrth-gefndir cryf a quenchers fflworoleuedd mewndarddol y gallu antagonistic.

Yn bedwerydd, dim ond rhyddhau templedi asid niwclëig sydd eu hangen ar y samplau a dargedir gan y dechnoleg Direct PCR, ac nid ydynt yn tynnu proteinau, polysacaridau, ïonau halen, ac ati sy'n ymyrryd â'r adwaith PCR.Sy'n ei gwneud yn ofynnol i'r asid niwclëig polymeras a PCR Cymysgedd yn y system adwaith i gael ymwrthedd ardderchog a gallu i addasu i sicrhau gweithgaredd ensymau a chywirdeb atgynhyrchu o dan amodau cymhleth.

Yn bumed, mae'r sampl meinwe a dargedir gan dechnoleg Direct PCR heb unrhyw driniaeth cyfoethogi asid niwclëig ac mae maint y templed yn fach iawn, sy'n ei gwneud yn ofynnol i'r system adwaith fod â sensitifrwydd ac effeithlonrwydd ymhelaethu hynod o uchel.