Arwain

RNA di-godio hir, mae lncRNA yn RNA di-godio sydd â hyd yn fwy na 200 niwcleotidau, yn gyffredinol rhwng 200-100000 nt.Mae lncRNA yn rheoleiddio mynegiant genynnau ar lefelau epigenetig, trawsgrifio ac ôl-trawsgrifio, ac yn cymryd rhan mewn tawelu cromosom X, argraffu genom ac addasu cromatin, actifadu trawsgrifio, ymyrraeth trawsgrifio, trafnidiaeth niwclear, rheoleiddio cylchredau celloedd, rheoleiddio gwahaniaethu celloedd, ac effeithiau iawndal dos (effaith iawndal dos) a llawer o brosesau rheoleiddio pwysig eraill yn gysylltiedig yn agos â digwyddiad, ataliad a chlefydau dynol ar hyn o bryd, maes un biofeddygol, ac ataliad poeth.

01  Mathau a nodweddion LncRNA

Mae lncRNA wedi'i rannu'n sawl math yn ôl gwahanol ffynonellau ei ffurfiad, fel y dangosir yn y ffigwr uchod.Mae ganddo'r nodweddion canlynol:

1. Mae lncRNAs fel arfer yn hirach, gyda mynegiant deinamig a gwahanol ddulliau splicing yn ystod gwahaniaethu
2. O'i gymharu â genynnau codio, fel arfer mae gan lncRNA lefel mynegiant is
3. Mae gan y rhan fwyaf o lncRNAs benodolrwydd mynegiant amser a gofodol amlwg yn y broses o wahaniaethu a datblygu meinwe
4. Mae ymadroddion nodweddiadol mewn tiwmorau a chlefydau eraill
5. Mae lleoliadau isgellog lncRNA yn amrywiol
6. Mae'r dilyniant yn isel mewn cadwraeth, ond mae gan y swyddogaeth rywfaint o gadwraeth, ac ati.

02 Cwestiynau Cyffredin am Trawsgrifiad Gwrthdro LncRNA

Oherwydd cynnwys isel lncRNA mewn celloedd, hyd hir a strwythur lefel uchel, mae gan RNA o'r fath yn aml strwythurau cymhleth fel dolenni coesyn neu binnau gwallt, ac mae RT-qPCR yn dueddol o gael problemau trawsgrifio gwrthdro aflwyddiannus neu effeithlonrwydd isel.

03 Datrysiad trawsgrifio gwrthdro LncRNA

Yn y rheol ganolog, gelwir y broses o firysau RNA yn defnyddio eu trawsgrifiad gwrthdro eu hunain i syntheseiddio DNA gan ddefnyddio RNA fel templed yn drawsgrifiad gwrthdro.Gelwir y broses o ddefnyddio trawsgrifiad gwrthdro firws RNA i syntheseiddio templed cDNA in vitro yn drawsgrifiad gwrthdro.Y prif elfennau sydd wedi'u cynnwys yn y system trawsgrifio cefn: templed RNA, trawsgrifiad gwrthdro, paent preimio a chydrannau eraill.

Templed 1.RNA

Adlewyrchir dylanwad templed RNA ar drawsgrifio o chwith yn ei strwythur, ei burdeb a'i gyfanrwydd.Po uchaf yw purdeb a chywirdeb yr RNA a echdynnwyd, yr uchaf yw effeithlonrwydd trawsgrifio gwrthdro a mwyaf cywir yw'r canlyniadau meintiol dilynol.Mae'r RNA sy'n cael ei buro gan adweithyddion echdynnu RNA a ddefnyddir yn gyffredin yn aml yn cynnwys gweddillion alcohol a halwynau guanidine, sy'n cael effaith ataliol gref ar y rhan fwyaf o'r transcriptase gwrthdro.

2.Reverse transcriptase

Mae gan transcriptase o chwith ddylanwad allweddol yn y system trawsgrifio cefn gyfan.Y tymheredd addas ar gyfer y trawsgrifiad cefn a ddefnyddir yn y rhan fwyaf o labordai yn gyffredinol yw 42°C.Mewn gwirionedd, mae agor y strwythur RNA lefel uchel yn gofyn am dymheredd uwch, ac mae'r gofynion ar gyfer y transcriptase gwrthdro yn uwch.

3.Preimiwr

Mae preimwyr trawsgrifio o chwith yn cynnwys paent preimio genyn-benodol, paent preimio ar hap a phremio Oligo dT.Nid yw'r rhan fwyaf o lncRNAs yn cynnwys cynffonau polyA, ac mae'n bwysig paru'r paent preimio ar hap ag Oligo dT yn iawn.

Cydrannau 4.Other

Yn wyneb y ffaith bod RNA yn arbennig o hawdd i'w ddiraddio, gellir lleihau cyflwyniad cydrannau yn y system trawsgrifio gwrthdro, a all atal mynediad RNase yn effeithiol a sicrhau cynnydd llyfn trawsgrifio gwrthdro.

Foregeneyn cael o dempled RNA, trawsgrifiad gwrthdro i qPCR

Hebryngwch eich canfodiad lncRNA yn gynhwysfawr

Cyfanswm Anifeiliaid RNA IunigeddKit (gyda cholofn tynnu gDNA)

Cyfanswm Cell RNA IunigeddKit (gyda cholofn tynnu gDNA)

Lnc-RT HeroTM I (Gyda gDNase)(Super Premix ar gyfer synthesis cDNA llinyn cyntaf o lncRNA)

Amser Real PCR EasyTM-SYBR Gwyrdd I

Amanteision ofEchdynnu RNA:

Mae'r pecyn yn defnyddio technoleg echdynnu RNA trydedd genhedlaeth, nid oes angen defnyddio DNase.

11 munud o 96, 24, 12, a chelloedd diwylliedig plât 6-ffynnon, echdynnu effeithlonrwydd uchel o RNA cyfanswm celloedd heb gDNA, purdeb uchel, o ansawdd uchel.

Manteision trawsgrifio cefn lncRNA:

System trawsgrifio o chwith a ddatblygwyd yn arbennig ar gyfer LncRNA i gael gwared ar halogiad DNA genomig yn gyflym.

Mae gan y system trawsgrifio gwrthdro sefydlogrwydd thermol uchel ac mae ganddi berfformiad trawsgrifio cefn da o hyd ar 50 ° C.

Gellir gwrthdroi templedi gyda chynnwys GC uchel a strwythur eilaidd cymhleth gydag effeithlonrwydd uchel.

Manteisionof qPCR:

Cychwyn poeth Mae gan Foregene Taq Polymerase effeithlonrwydd ymhelaethu uwch, sensitifrwydd mwyhau uwch, a phenodoldeb mwyhau uwch

Mae'r Real PCR Easy Mix wedi'i optimeiddio yn golygu bod gan SYBR Green I sensitifrwydd canfod uwch, ac mae ei ddwysedd fflworoleuedd 3-5 gwaith yn fwy na chynhyrchion tebyg, a all ddiwallu anghenion gwahanol fathau o arbrofion meintiol fflworoleuedd.