Faint ydych chi'n ei wybod

Am Nechdynnu asid wcleig

Dechrau a diwedd asid niwclëig wedi'i buro

Mae popeth yn anodd ar y dechrau, asid niwclëig wedi'i buro yw'r mwyaf

Cychwyn arbrofion moleciwlaidd, ar gyfer arbrofion dilynol

Mae llwyddiant neu fethiant yn cael effaith hollbwysig.

Mae llawer o ymchwilwyr gwyddonol yn ffafrio sbectroffotomedr UV olrhain/ultrac oherwydd gall ganfod crynodiad asid niwclëig a gweddillion ïon protein a halen yn syml, yn gyflym ac yn economaidd.

Fel y gwyddom i gyd, mae A260 yn golygu gwerth amsugniad asid niwclëig OD, mae A280 yn golygu gwerth amsugniad crynodiad protein OD, mae A230 yn golygu gwerth amsugniad crynodiad ïon halen OD, felly gall A260 drosi crynodiad asid niwclëig, mae A260/280 yn golygu gweddillion protein, mae A260/230 yn golygu gweddillion ïon halen, ond mae ymchwilwyr wedi'u seilio ar fesuriad mawr yn unig.confensiynol” i gredu y gall esbonio purdeb DNA ac RNA ii raddau.Nid dyma'r unig safon ar gyfer adnabod cynnyrch asid niwclëig a phurdeb, fe'i defnyddir fel cyfeiriad yn unig, ac nid yw'n “safon aur”.

Mae llawlyfr Thermo Fisher ND-2000 yn pwysleisio dibynadwyedd canlyniadau'r profion

Y rheswm yw bod y canlyniadau a geir trwy ddefnyddio sbectroffotomedr UV micro / ultramicro yn adlewyrchu cynnyrch a phurdeb asid niwclëig o'r ochr yn unig, ac mae yna lawer o ffactorau dylanwadol (llwybr optegol, cyfaint sampl, crynodiad sampl, gwerth pH, ​​ïonau eraill sy'n effeithio ar fesur amsugno, ac ati), nid yw'r gwerth OD wedi'i fesur o reidrwydd yn gywir.Ar yr un pryd, oherwydd diffyg penodoldeb y deunydd pennu gwerth amsugnedd, mae gan DNA un llinyn, DNA llinyn dwbl, RNA, dNTPs, a rhai proteinau oll uchafbwynt amsugno ar donfedd 260nm, ac nid yw'r crynodiad a bennir gan A260 yn unig o reidrwydd yn DNA neu RNA go iawn.Ni ellir barnu crynodiad, a'i gyfanrwydd a'i ddiraddiad.

Felly sut i farnu ansawdd ein asid niwclëig wedi'i buro?Yn ogystal â defnyddio sbectroffotomedr UV micro/ultramicro i'w ganfod, mae angen dulliau megis electrofforesis gel agarose hefyd i arddangos purdeb a chyfanrwydd yr asid niwclëig yn weledol, ac i nodi'r crynodiad i raddau.Yn y modd hwn, mae'r cynnyrch asid niwclëig a'r purdeb a geir o ganlyniadau canfod gwahanol ddulliau yn gredadwy.

Cymhariaeth siart arbrofol

Echdynnwyd DNA genomig o gelloedd H1299 gan ddefnyddio pecynnau Echdynnu DNA cwmni A, a gwelwyd halogiad amhuredd sylweddol, gan arwain at werthoedd OD uchel

(gwerth mesur OD ac electrofferogram cyfatebol)

Mynegai gwerthuso

A oes “safon aur” ar gyfer cynnyrch asid niwclëig a phrofi ansawdd?

Hyd y gwyddom, nid oes dull syml, cyflym a rhad.P'un a yw'n sbectrophotometer, electrofforesis gel, neu sbectrometreg màs, maent i gyd yn adlewyrchu crynodiad a phurdeb asid niwclëig yn yr hydoddiant o wahanol agweddau, ac mae angen eu barnu trwy gyfeirio at ei gilydd.

Mae'r mynegai gwerthuso gorau bob amsery cais arbrofol dilynol.Nid yw'n effeithio ar effeithlonrwydd trawsgrifio gwrthdro ac ymhelaethu PCR.Mae cael cynhyrchion ymhelaethu dibynadwy a gwerthoedd Ct, a chael dilyniant cyflawn trwy ddilyniannu yn echdynnu asid niwclëig yn llwyddiannus.

I grynhoi, dylai'r farn o ddamcaniaeth cymhareb yn unig gael ei herio gan y farn o “ddefnyddio canlyniadau arbrofol da i lawr yr afon fel paramedrau echdynnu da”!

Argymhellir pecynnau echdynnu RNA DNA Foregene i gael purdeb DNA/RNA uchel:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/