Yn ddiweddar, darganfyddais rywbeth anhygoel!Nid yw llawer o weithwyr proffesiynol arbrofion uwch o'i gwmpas hyd yn oed yn gwybod rhai pwyntiau gwybodaeth arbrofol sylfaenol iawn.

Er enghraifft, allwch chi ateb y cwestiynau canlynol?

A oes gwahaniaeth rhwng OD260 ac A260?Beth mae pob un yn ei olygu?
OD yw'r talfyriad o ddwysedd optegol (dwysedd optegol), A yw'r talfyriad o amsugnedd (amsugno), mae'r ddau gysyniad yr un peth mewn gwirionedd, "dwysedd optegol" yw "amsugno", ond mae "dwysedd optegol" yn unol â'r rhan fwyaf o safonau cenedlaethol ac yn fwy safonol.

Fel arfer rydym yn mesur y gwerth OD ar 260nm i gyfrifo'r crynodiad asid niwclëig, felly beth mae 1OD yn ei gynrychioli?
Mae gan asid niwcleig uchafbwynt amsugno uchaf ar donfedd o 260nm, sy'n cynnwys DNA ac RNA, yn ogystal â darnau asid niwclëig tameidiog (dyma'r pwynt allweddol).
Cofnodwyd y gwerth OD a fesurwyd ar donfedd o 260 nm fel OD260.Os yw'r sampl yn bur, gall y gwerth OD260 gyfrifo crynodiad y sampl asid niwclëig.
1 OD260=50 μg/ml dsDNA (DNA llinyn dwbl)
=37 μg/ml ssDNA (DNA un llinyn)
=40 μg/ml RNA
=30 μg/ml dNTPs (oligonucleotides)
A oes unrhyw gysylltiad a gwahaniaeth rhwng RT-PCR, Realtime-PCR a QPCR?
Mae RT-PCR yn fyr ar gyfer Trawsgrifiad Gwrthdroi PCR
Amser Real PCR=qPCR, yn fyr ar gyfer PCR Amser Real Meintiol
Er bod PCR Amser Real (PCR meintiol fflwroleuol amser real) a PCR Trawsgrifio Gwrthdroi (PCR trawsgrifio gwrthdro) ill dau yn ymddangos i gael eu talfyrru fel RT-PCR.Ond y confensiwn rhyngwladol yw: mae RT-PCR yn cyfeirio'n benodol at PCR trawsgrifio gwrthdro.

Beth yw'r nt, bp, a kb a ddefnyddir yn gyffredin i ddisgrifio hyd DNA/RNA mewn bioleg?
nt = niwcleotid
bp = pâr sylfaen pâr sylfaen
kb = kilobase

Wrth gwrs, byddech chi'n dweud nad yw llawer o bobl yn poeni am y manylion bach hyn!Mae pawb yn gwneud hyn, ac ni fydd neb yn gofyn i chi beth ydyw.Rydych chi'n gwybod bod hyn yn ddiangen, iawn?

Na, Na, Na, mae'n angenrheidiol iawn gwybod hyn!oherwydd pa un?
Achos dych chi eisiau postio erthygl!Brawd!P'un a ydych chi'n anelu at raddio neu'n dilyn cyflawniadau ymchwil wyddonol, rhaid i chi ddibynnu ar erthyglau i siarad!

Echdynnu asid niwcleig ddylai fod yr arbrawf symlaf a mwyaf sylfaenol.Mae ansawdd echdynnu asid niwclëig yn pennu canlyniadau arbrofion dilynol yn uniongyrchol.

Er fy mod wedi ei ddweud droeon, mae yna lawer o ffrindiau o hyd sydd ddim yn poeni.Y tro hwn penderfynais symud allan o'r erthygl!

Isafswm Gwybodaeth ar gyfer Cyhoeddi Arbrofion PCR Amser Real Meintiol, y cyfeirir atynt fel MIQE, yn set o ganllawiau arbrofion meintiol fflworoleuedd a lansiwyd yn rhyngwladol, sy'n cynnig safonau gofynnol ar gyfer y wybodaeth arbrofol sy'n angenrheidiol ar gyfer gwerthuso arbrofion meintiol fflworoleuedd PCR a chyhoeddi erthyglau.Trwy'r amodau arbrofol a'r dulliau dadansoddi a ddarperir gan yr arbrofwr, gall yr adolygwyr werthuso dilysrwydd cynllun arbrofol yr ymchwilydd yn well.

Gellir gweld bod yr eitemau canfod canlynol wedi'u cynnig yn yr adran echdynnu asid niwclëig,

Mae “E” yn nodi gwybodaeth y mae'n rhaid ei darparu ac mae “D” yn nodi gwybodaeth y dylid ei darparu os oes angen.

Mae'r ffurflen yn gymhleth iawn, a dweud y gwir, rwyf am ddweud bod angen i bawb ddechrau o

purdeb (D), cynnyrch (D), cyfanrwydd (E) a chysondeb (E) i werthuso asidau niwcleig yn y pedair agwedd hyn.

Yn ôl arferion arbrofol, siaradwch yn gyntaf am y dulliau gwerthuso o purdeb a chanolbwyntio.

Mesur OD yw'r hoff ddull canfod a hawsaf i arbrofwyr.O ran yr egwyddor, nid af i fanylion yma.Mae llawer o labordai bellach yn defnyddio sbectroffotomedrau uwch-micro i ddadansoddi samplau asid niwclëig yn feintiol.Wrth arddangos y gwerth amsugnedd, mae'r rhaglen yn rhoi'r gwerth crynodiad yn uniongyrchol (asid niwclëig, protein a llifyn fflwroleuol) a chymarebau cysylltiedig.O ran y dadansoddiad o'r gwerth OD, Arbedwch y llun hwn a byddwch yn iawn.

Rhestr datrysiadau gwerth OD cyffredinol

Fodd bynnag, mae rhai rhybuddion y mae angen eu cyflwyno ar wahân i chi.

(Wedi'r cyfan, dwi'n gwybod bod yn rhaid mai chi yw'r rhai sy'n cynilo ac yn aros nes bod eu hangen arnoch chi!)

Nodyn 1 Offer

Bydd y gwerth OD yn cael ei effeithio gan wahanol offer.Cyn belled â bod yr OD260 o fewn ystod benodol, mae gwerthoedd OD230 ac OD280 yn ystyrlon.Er enghraifft, ystod amsugnedd yr Eppendorf D30 cyffredin ar 260nm yw 0 ~ 3A, ac mae NanoDrop One Thermo yn 260nm.Yr ystod amsugno o 0.5 ~ 62.5A.

Nodyn 2Adweithydd gwanhau

Gall gwanhau gwahanol adweithyddion effeithio ar y gwerth OD.Er enghraifft, darlleniad OD260/280 o RNA wedi'i buro mewn pH7.5 10mM Trisbyffer yw rhwng 1.9-2.1, tra ynhydoddiant dyfrllyd niwtralbydd y gymhareb yn is, efallai dim ond 1.8-2.0, ond nid yw hyn yn golygu bod ansawdd RNA yn newid Gwahaniaeth.

Nodyn 3Sylweddau gweddilliol

Bydd bodolaeth sylweddau gweddilliol yn effeithio ar gywirdeb mesur crynodiad asid niwclëig, felly mae angen osgoi protein, ffenol, polysacarid a gweddillion polyphenol mewn samplau asid niwclëig cymaint â phosibl.

Fodd bynnag, mewn gwirionedd, mae echdynnu ag adweithyddion organig yn hen ddull.Mewn pecynnau masnachol, gellir cyflawni'r effaith echdynnu trwy golofn arsugniad sy'n seiliedig ar silica ynghyd â centrifugation, gan osgoi adweithyddion organig gwenwynig a niweidiol sy'n anodd eu tynnu, ac ati Y broblem, megisNid yw pecyn echdynnu asid niwclëig Foregene yn defnyddio DNase / RNase ac adweithyddion organig gwenwynig trwy gydol y llawdriniaeth, yn gyflym ac yn ddiogel, a'reffaith ywdda(Dywedodd ar ddamwain ei fod yn foel, ond gwn eich bod am wybod).

Enghraifft 1: Cnwd a phurdeb echdynnu DNA genomig

Mae Pecyn Ynysu DNA Pridd Foregene (DE-05511) yn trin samplau pridd o ffynonellau amrywiol, a dangosir swm a phurdeb y DNA genomig a gafwyd yn y tabl canlynol:
Enghraifft 2: Cnwd echdynnu RNA meinwe a phurdeb

Prosesodd Pecyn Ynysu RNA Cyfanswm Anifeiliaid (RE-03012) samplau meinwe amrywiol, a dangosir swm a phurdeb RNA a gafwyd yn y tabl isod (ar gyfer meinwe llygoden):
Fodd bynnag, peidiwch â meddwl eich bod wedi gorffen gyda'r gwerth OD.A oes gennych unrhyw ofal o'r pwyntiau allweddol a dynnais i chi yn y blaen?

Hysbysiad

Bydd moleciwlau asid niwclëig darniog hefyd yn cael eu cyfrifo yn yr amsugnedd.Gan dybio bod gennych weddillion DNA genomig yn yr RNA, bydd eich gwerth OD yn ymddangos yn uchel iawn, ond ni ellir pennu crynodiad gwirioneddol RNA.P'un a yw eich RNA yn Nid yw'n glir a oes diraddio, felly mae angen dull gwerthuso cynhwysfawr o hyd i roi dyfarniad mwy cywir, hynny yw, y gwerthusiad cyfanrwydd asid niwclëig a grybwyllir yn MIQE.