Sterileiddio tomenni pibed a thiwbiau EP, ac ati.

1. Paratowch 0.1% (milfed) DEPC (sylwedd hynod wenwynig) gyda dŵr wedi'i ddad-ïoneiddio, ei ddefnyddio'n ofalus mewn cwfl mygdarth, a'i storio ar 4°C i ffwrdd o olau;

Mae dŵr DEPC yn ddŵr pur sy'n cael ei drin â DEPC a'i sterileiddio gan dymheredd uchel a gwasgedd uchel.Wedi'i brofi i fod yn rhydd o RNase, DNase a proteinas.

2. Rhowch y tip pibed a'r tiwb EP i mewn i 0.1% DEPC, a sicrhau bod y tip pibed a'r tiwb EP yn cael eu llenwi â 0.1% DEP.

3. Diogelu rhag golau, gadewch i chi sefyll, dros nos (12-24h)

4. Nid oes angen socian y blwch sy'n cynnwys y domen a'r tiwb EP yn DEPC.Ar ôl tynnu'r dŵr DEPC yn fras yn y domen neu'r tiwb EP, paciwch ef a'i lapio.

5. 121 gradd Celsius, 30min

6. 180 gradd Celsius, sych am sawl awr (o leiaf 3 awr)

Nodyn: a.Gwisgwch fenig a masgiau latecs wrth drin DEPC!b, neu heb sterileiddio DEPC, 130 ℃, awtoclaf 90 munud (sterileiddio tymheredd uchel llawer o labordai ddwywaith)

Ystyriaethau echdynnu RNA

Dau brif ffenomen o fethiant ynysu RNA meinwe

Diraddio RNA a gweddillion amhureddau mewn meinweoedd,o ran diraddio, gadewch i ni edrych yn gyntaf ar pam nad yw'n hawdd diraddio RNA a dynnwyd o gelloedd diwylliedig.Mae adweithyddion echdynnu RNA presennol i gyd yn cynnwys cydrannau sy'n atal RNase yn gyflym.Ychwanegwch y lysate i'r celloedd diwylliedig, a'i gymysgu'n syml, gellir cymysgu'r holl gelloedd yn drylwyr â'r lysate, ac mae'r celloedd wedi'u lysed yn llwyr.Ar ôl i'r celloedd gael eu lysed, mae'r cynhwysion actif yn y lysate yn atal yr RNase mewngellol ar unwaith, felly mae'r RNA yn parhau'n gyfan.Hynny yw, oherwydd bod y celloedd diwylliedig wedi'u cysylltu'n hawdd ac yn llawn â'r lysate, nid yw'n hawdd diraddio eu RNA;ar y llaw arall, mae'r RNA yn y meinwe yn cael ei ddiraddio'n hawdd oherwydd nad yw'r celloedd yn y meinwe yn hawdd i gysylltu â'r lysate yn gyflym.oherwydd cyswllt digonol.Felly,gan dybio bod ffordd i droi'r meinwe yn un gell tra'n atal gweithgaredd RNA, gellid datrys y broblem o ddiraddio yn llwyr.

Melin nitrogen hylifol yw'r dull mwyaf effeithiol o'r fath.Fodd bynnag, mae'r dull melino nitrogen hylifol yn drafferthus iawn, yn enwedig pan fo nifer y samplau yn fawr.Arweiniodd hyn at y peth gorau nesaf: y homogenizer.Mae'rhomogenizerNid yw'r dull hwn yn ystyried y cwestiwn o sut mae gweithgaredd RNase yn cael ei atal cyn cysylltu celloedd â'r lysate, ond yn hytrach mae'n gweddïo bod cyfradd yr aflonyddwch meinwe yn gyflymach na'r gyfradd y mae RNase mewngellol yn diraddio RN.

Mae effaith homogenizer trydan yn well,ac mae effaith homogenizer gwydr yn wael, ond yn gyffredinol, ni all y dull homogenizer atal y ffenomen diraddio.Felly, os yw'r echdynnu wedi'i ddiraddio, dylid defnyddio'r homogenizer trydan gwreiddiol ar gyfer malu â nitrogen hylif;dylid newid y homogenizer gwydr gwreiddiol i homogenizer trydan neu ei falu'n uniongyrchol â nitrogen hylifol.Mae'r broblem bron 100% yn ymarferol.cael ei ddatrys.

Mae gan y broblem gweddillion amhuredd sy'n effeithio ar arbrofion dilynol achosion mwy amrywiol na diraddio, ac mae'r atebion yn gyfatebol wahanol.I gloi,os oes diraddiad neu amhureddau gweddilliol yn y meinwe, rhaid optimeiddio'r dull echdynnu/adweithydd ar gyfer y deunydd arbrofol penodol.Nid oes rhaid i chi ddefnyddio'ch samplau gwerthfawr ar gyfer optimeiddio: gallwch brynu rhai anifeiliaid bach fel pysgod / cyw iâr o'r farchnad, cymryd y rhan gyfatebol o'r deunydd ar gyfer echdynnu RNA, a'r rhan arall ar gyfer echdynnu protein - malu â'r geg, y stumog a'r coluddion Detholiad.

Defnyddir RNA targed yr RNA a echdynnwyd ar gyfer gwahanol arbrofion dilynol, ac mae ei ofynion ansawdd yn wahanol

Mae adeiladu llyfrgell cDNA yn gofyn am gyfanrwydd RNA heb weddillion atalyddion adwaith ensymau;Mae angen cywirdeb RNA uwch ar y gogledd a gofynion is ar gyfer gweddillion atalyddion adwaith ensymau;Nid oes angen uniondeb RNA rhy uchel ar RT-PCR,ond yn atal adweithiau ensymau.Mae gofynion gweddillion yn llym.Mae'r mewnbwn yn pennu'r allbwn;bob tro y nod yw cael yr RNA purdeb uchaf, bydd yn costio'r bobl a'r arian.

Casglu/Storio Samplau

Ffactorau sy'n Effeithio Diraddio Ar ôl i'r sampl adael y corff byw/neu'r amgylchedd twf gwreiddiol, bydd yr ensymau mewndarddol yn y sampl yn dechrau diraddio RNA,ac mae'r gyfradd ddiraddio yn gysylltiedig â chynnwys ensymau mewndarddol a thymheredd.Yn draddodiadol, dim ond dwy ffordd sydd i atal gweithgaredd ensymau mewndarddol yn llwyr: ychwanegu lysate ar unwaith a homogeneiddio'n drylwyr ac yn gyflym;torri'n ddarnau bach a'i rewi ar unwaith mewn nitrogen hylifol.Mae angen gweithrediad cyflym ar y ddau ddull.Mae'r olaf yn addas ar gyfer pob sampl, tra bod y cyntaf ond yn addas ar gyfer meinweoedd â chynnwys isel o gelloedd ac ensymau mewndarddol ac yn haws eu homogeneiddio.Yn benodol, mae'n well rhewi meinwe planhigion, afu, thymws, pancreas, dueg, ymennydd, braster, meinwe cyhyrau, ac ati â nitrogen hylifol cyn symud ymlaen.

Darnio a homogeneiddio samplau

Ffactorau sy'n Effeithio Diraddio a Chynnyrch Darniad sampl ywar gyfer homogenization trylwyr, sydd ar gyfer rhyddhau RNA yn gyflawn ac yn gyflawn.Gellir homogeneiddio celloedd yn uniongyrchol heb gael eu torri.Dim ond ar ôl cael eu torri y gellir homogeneiddio meinweoedd.Mae angen torri burum a bacteria ag ensymau cyfatebol cyn y gellir eu homogeneiddio.Gall meinweoedd â chynnwys ensymau mewndarddol is a homogenization haws gael eu malu a'u homogeneiddio ar un adeg yn y lysate gan homogenizer;meinwe planhigion, afu, thymws, pancreas, dueg, ymennydd, braster, meinwe cyhyrau a samplau eraill, Maent naill ai'n uchel mewn ensymau mewndarddol neu nid ydynt yn hawdd eu homogeneiddio,felly rhaid perfformio aflonyddwch meinwe a homogenization ar wahân.Y dull darnio mwyaf dibynadwy a mwyaf cynhyrchiol yw melino â nitrogen hylifol, a'r dull mwyaf dibynadwy o homogenization yw defnyddio homogenizer trydan.Nodyn arbennig ynghylch melino â nitrogen hylifol: rhaid peidio â dadmer y sampl yn ystod y broses felino gyfan, gan fod ensymau mewndarddol yn fwy tebygol o weithredu pan fyddant wedi'u rhewi.

Dewis o lysate

Effeithio ar gyfleustra gweithrediad a ffactorau amhureddau mewndarddol gweddilliol Gall yr hydoddiannau lysis a ddefnyddir yn gyffredin bron atal gweithgaredd RNase.Felly, y pwynt allweddol o ddewis ateb lysis yw ystyried mewn cyfuniad â'r dull puro.Mae un eithriad:argymhellir defnyddio samplau â chynnwys ensymau mewndarddol uchel i ddefnyddio lysate sy'n cynnwys ffenol i gynyddu'r gallu i anactifadu ensymau mewndarddol.

Dewis dull puro

Ffactorau sy'n effeithio ar amhureddau mewndarddol gweddilliol, cyflymder echdynnu Ar gyfer samplau glân fel celloedd, gellir cael canlyniadau boddhaol gyda bron unrhyw ddull puro wrth law.Ond ar gyfer llawer o samplau eraill, yn enwedig y rhai â lefelau uchel o amhureddau fel planhigion, afu, bacteria, ac ati, mae dewis dull puro addas yn hanfodol.Mae gan y dull puro allgyrchol colofn gyflymder echdynnu cyflym a gall gael gwared ar amhureddau sy'n effeithio ar adwaith ensymatig dilynol RNA yn effeithiol, ond mae'n ddrud (gall Foregene gynnig citiau cost-effeithiol, mwy o fanylion cliciwchyma);gall defnyddio dulliau puro economaidd a chlasurol, megis dyddodiad LiCl, hefyd gael canlyniadau boddhaol, ond mae'r amser gweithredu yn hir..

“Tri Disgyblaeth ac Wyth Sylw” ar gyfer Echdynnu RNA

Disgyblaeth 1:Rhoi diwedd ar halogiad ensymau alldarddol.

Nodyn 1:Gwisgwch fasgiau a menig yn llym.

Nodyn 2:Dylid cael gwared yn drylwyr ar y tiwbiau centrifuge, pennau'r tomennydd, y rhodenni pibed, y tanciau electrofforesis, a'r meinciau arbrofol sy'n rhan o'r arbrawf.

Nodyn 3:Rhaid i'r adweithyddion/toddion sy'n rhan o'r arbrawf, yn enwedig dŵr, fod yn rhydd o RNase.

Disgyblaeth 2:Rhwystro gweithgaredd ensymau mewndarddol

Nodyn 4:Dewiswch ddull homogeneiddio priodol.

Nodyn 5:Dewiswch lysate priodol.

Nodyn 6:Rheoli swm cychwynnol y sampl.

Disgyblaeth 3:Eglurwch eich pwrpas echdynnu

Nodyn 7:Gydag unrhyw system lysate yn agosáu at uchafswm cychwynnol y sampl, mae'r gyfradd llwyddiant echdynnu yn gostwng yn sydyn.

Nodyn 8:Yr unig faen prawf economaidd ar gyfer echdynnu RNA yn llwyddiannus yw llwyddiant mewn arbrofion dilynol, nid cynnyrch.

10 Ffynonellau Gorau o Halogiad RNase

1. Bysedd yw ffynhonnell gyntaf ensymau alldarddol, felly rhaid gwisgo menig a'u disodli'n aml.Yn ogystal, rhaid gwisgo masgiau hefyd, oherwydd mae anadlu hefyd yn ffynhonnell bwysig o ensymau.Mantais ychwanegol gwisgo mwgwd maneg yw amddiffyn yr arbrofwr.

2. Awgrymiadau pibed, tiwbiau allgyrchu, pibedau - ni all RNase gael ei anactifadu trwy sterileiddio yn unig, felly dylid trin blaenau pibed a thiwbiau allgyrchu gyda DEPC, hyd yn oed os ydynt wedi'u marcio fel DEPC wedi'u trin.Mae'n well defnyddio pibed pwrpas arbennig, ei sychu â phêl cotwm alcohol 75% cyn ei ddefnyddio, yn enwedig y wialen;yn ogystal, gofalwch eich bod yn peidio â defnyddio remover pen.

3. Rhaid i'r dŵr/byffer fod yn rhydd o halogiad RNase.

4. O leiaf dylid sychu'r bwrdd prawf yn lân gyda pheli cotwm 75% alcohol.

RNase 5.Edogenous Mae pob meinwe yn cynnwys ensymau mewndarddol, felly rhewi cyflym meinweoedd â nitrogen hylifol yw'r ffordd orau o leihau diraddio.Mae'r dull storio / malu nitrogen hylifol yn anghyfleus yn wir, ond dyma'r unig ffordd i feinweoedd â lefelau uchel o ensymau mewndarddol.

6. Samplau RNA Gall cynhyrchion echdynnu RNA gynnwys olion halogiad RNase.

7. Echdynnu plasmid Mae echdynnu plasmid yn aml yn defnyddio Rnase i ddiraddio RNA, a dylai'r Rnase gweddilliol gael ei dreulio â Proteinase K a'i dynnu gan PCI.

8. Storio RNA Hyd yn oed os caiff ei storio ar dymheredd isel, bydd symiau hybrin o RNase yn achosi diraddiad RNA.Yr ateb gorau ar gyfer cadw RNA yn y tymor hir yw ataliad halen/alcohol, gan fod alcohol yn atal pob gweithgaredd ensymatig ar dymheredd isel.

9. Pan fydd cationau (Ca, Mg) yn cynnwys yr ïonau hyn, bydd gwresogi ar 80C am 5 munud yn achosi hollti RNA, felly os oes angen cynhesu RNA, mae angen i'r hydoddiant cadw gynnwys asiant chelating (Sodiwm Citrate 1mM, pH 6.4).

10. Gall ensymau a ddefnyddir mewn arbrofion dilynol gael eu halogi gan RNase.

10 Awgrym ar gyfer Echdynnu RNA

1: Atal gweithgaredd RNase yn gyflym.Mae samplau'n cael eu rhewi'n gyflym ar ôl eu casglu, ac mae RNase yn cael ei anactifadu gan weithrediad cyflym yn ystod lysis.

2: Dewiswch ddull echdynnu priodol ar gyfer meinwe â chynnwys ribosym uchel, a meinwe adipose sydd orau i ddefnyddio'r dull sy'n cynnwys ffenol.

3: Mae ansawdd rhagfynegiad yn gofyn am Ogleddol, mae angen cywirdeb uchel ar gyfer adeiladu llyfrgell cDNA, ac nid oes angen cywirdeb uchel ar RT-PCR ac RPA (assay amddiffyn Ribonuclease).Mae angen purdeb uchel (gweddillion atalyddion ensymau) ar RT-PCR.

4: homogeneiddio trylwyr yw'r allwedd i wella cynnyrch a lleihau diraddio.

5: Gwiriwch uniondeb canfod electrofforesis RNA, mae 28S: 18S = 2: 1 yn arwydd cyflawn, mae 1: 1 hefyd yn dderbyniol ar gyfer y rhan fwyaf o arbrofion.

6: Tynnu DNA ar gyfer RT-PCR, dadansoddiad arae Mae'n well defnyddio Dnase I i gael gwared ar DNA.

7: Lleihau halogiad ensymau alldarddol – ni ellir mewnforio ensymau o'r tu allan.

8: Wrth ganolbwyntio asid niwclëig crynodiad isel, dylid ychwanegu adweithydd cyd-dyodiad.Ond i atal y cyd-precipitant cynnwys ensymau a halogiad DNA.

9: Toddwch yr RNA yn drylwyr, os oes angen, cynheswch ar 65C am 5 munud.

dull storio addas

Gellir ei storio ar -20C am gyfnod byr, ac ar -80C am amser hir.Y cam cyntaf wrth wella cynnyrch RNA yw sylweddoli bod cynnwys RNA gwahanol samplau yn amrywio'n fawr.Digonedd uchel (2-4ug/mg) fel yr afu, y pancreas, y galon, digonedd canolig (0.05-2ug/mg) fel ymennydd, embryo, yr arennau, yr ysgyfaint, thymws, ofari, digonedd isel (<0.05ug/mg) mg) fel y bledren, asgwrn, braster.

1: Celloedd Lyse i ryddhau RN - os na chaiff RNA ei ryddhau, bydd y cynnyrch yn cael ei leihau.Mae homogeneiddio trydan yn gweithio'n well na dulliau homogeneiddio eraill, ond efallai y bydd angen ei gyfuno â dulliau eraill hefyd, megis stwnsio nitrogen hylifol, treuliad enzymatig (Lysosyme / Lyticase)

2: Optimeiddio'r dull echdynnu.Y problemau mwyaf gyda dulliau sy'n seiliedig ar ffenol yw haeniad anghyflawn a cholled RNA rhannol (ni ellir tynnu'r uwchnatant yn llwyr).Mae haeniad anghyflawn yn ganlyniad i gynnwys asid niwclëig uchel a phrotein, y gellir ei ddatrys trwy gynyddu faint o lysate a ddefnyddir neu leihau faint o sampl.Ychwanegwyd cam o echdynnu clorofform at y meinwe adipose.Gellir lleihau colled RNA trwy bwmpio ôl neu trwy dynnu'r haen organig ac yna allgyrchu.Y broblem fwyaf gyda dulliau sy'n seiliedig ar allgyrchiant colofn yw sampl gormodol.

Awgrymiadau Echdynnu Clasurol

1. Puro ffenol: Ychwanegwch gyfaint cyfartal o ffenol/clorofform 1:1 a chymysgwch yn egnïol am 1-2 funud.Centrifuge ar gyflymder uchel am 2 funud.Tynnwch y supernatant (80-90%) yn ofalus.Peidiwch byth â chyrraedd yr haen ganol.Gellir ychwanegu cyfaint cyfartal o hydoddiant yr adwaith at ffenol/clorofform a thynnu'r uwchnatant.Gellir cymysgu'r ddau supernatants gyda'i gilydd ar gyfer dyddodiad asid niwclëig i wella'r cynnyrch.Peidiwch â bod yn rhy ysgafn wrth gymysgu, a pheidiwch â cheisio tynnu'r holl supernatant.

2. Golchi gyda 70-80% ethanol: Yn ystod golchi, rhaid atal yr asid niwclëig i sicrhau bod yr halen gweddilliol yn cael ei olchi i ffwrdd.Ar yr un pryd, yn syth ar ôl arllwys oddi ar y ethanol, centrifuge ar gyflymder uchel am ychydig eiliadau, ac yna tynnwch y ethanol gweddilliol gyda phibed.Hydoddwch ar ôl sefyll ar dymheredd yr ystafell am 5-10 munud.

11. Echdynnu sefydliadau arbennig

1. Meinwe ffibrog: Yr allwedd i echdynnu RNA o feinwe ffibrog fel cyhyr y galon/sgerbydol yw amharu'n llwyr ar y meinwe.Mae gan y meinweoedd hyn ddwysedd celloedd isel, felly mae'r swm o RNA fesul uned pwysau meinwe yn isel, ac mae'n well defnyddio cymaint o swm cychwynnol â phosib.Byddwch yn siwr i falu'r meinwe yn drylwyr o dan amodau rhewi.

2. Meinweoedd sy'n cynnwys llawer o brotein/braster: mae cynnwys braster yr ymennydd/llysiau yn uchel.Ar ôl echdynnu PCI, mae'r supernatant yn cynnwys floccules gwyn.Rhaid ail-echdynnu'r supernatant gyda chlorofform.

3. Meinweoedd sy'n cynnwys asid niwclëig uchel/ribosym: mae gan y ddueg/thymws lefel uchel o asid niwclëig a ribosym.Gall malu meinwe o dan amodau rhewi ac yna homogeneiddio cyflym anactifadu ribosymau yn effeithiol.Fodd bynnag, os yw'r lysate yn rhy viscous (oherwydd cynnwys asid niwclëig uchel), ni fydd yr echdyniad PCI yn gallu haenu'n effeithiol;gall ychwanegu mwy o lysate ddatrys y mater hwn.Gall echdynnu PCI lluosog gael gwared â mwy o DNA gweddilliol.Os yw gwaddod gwyn yn ffurfio yn syth ar ôl ychwanegu alcohol, mae'n dynodi halogiad DNA.Gall ail-echdynnu gyda PCI asidig ar ôl diddymu gael gwared â halogiad DNA.

4. Meinwe planhigion: Mae meinwe planhigion yn fwy cymhleth na meinwe anifeiliaid.Yn gyffredinol, mae planhigion yn ddaear o dan amodau nitrogen hylifol, felly mae diraddio RNA gan ensymau mewndarddol yn anghyffredin.Os na chaiff y broblem ddiraddio ei datrys, mae bron yn sicr yn cael ei achosi gan amhureddau a gynhwysir yn y sampl.Bydd yr amhureddau sydd wedi'u cynnwys mewn llawer o blanhigion yn arwain at weddillion, a'r rheswm dros weddillion yn aml yw bod gan yr amhureddau hyn rai tebygrwydd i RNA: rydych chi'n gwaddodi ac rydw i'n gwaddodi, ac rydych chi'n arsugniad ac rydw i'n arsugniad.Mae'r nodweddion hyn yn pennu eu bod yn atalyddion ensymau cryf iawn.

Ar hyn o bryd, gellir addasu adweithyddion echdynnu RNA masnachol i bron pob meinwe anifeiliaid gydag addasiadau bach, ond ychydig o adweithyddion echdynnu RNA masnachol a all fod yn addas ar gyfer y rhan fwyaf o feinweoedd planhigion.Yn ffodus, gall Foregene ddarparu arbennigpecynnau echdynnu RNA planhigion, mae gennymPlanhigion Pecyn Ynysu RNA Cyfanswm, Plannu Pecyn Ynysu RNA Cyfanswm Plws.Mae'r olaf wedi'i ddylunio'n arbennig ar gyfer planhigion sydd â chynnwys polysacarid a polyphenol uchel.Ar gyfer echdynnu RNA, mae adborth gan ddefnyddwyr labordy yn arbennig o dda.

12. Effaith rhewi a dadmer sampl Gall y sampl wedi'i rewi fod yn fwy, ac mae angen ei dorri cyn ei ddefnyddio ar gyfer echdynnu RNA.Mae samplau yn tueddu i doddi (yn rhannol o bosibl) wrth dorri.Efallai y bydd angen pwyso samplau wedi'u rhewi cyn echdynnu RNA, a bydd dadmer yn bendant yn digwydd yn ystod y broses hon.Weithiau, mae dadmer y sampl hefyd yn digwydd yn ystod y broses melino nitrogen hylifol;neu mae'r sampl wedi'i rewi yn cael ei ychwanegu'n uniongyrchol at y lysate heb melino nitrogen hylifol, a bydd dadmer yn bendant yn digwydd cyn y homogenization cyflawn.Mae arbrofion wedi dangos bod meinwe wedi'i rewi yn fwy tueddol o ddiraddio RNA yn ystod dadmer na meinwe ffres.Y rheswm tebygol: Mae'r broses rhewi-dadmer yn tarfu ar strwythurau o fewn y gell, gan ei gwneud hi'n haws i ensymau mewndarddol ddod i gysylltiad uniongyrchol â'r RNA.

13. Dyfarniad o ansawdd RNA Fel arfer, defnyddir electrofforesis i farnu cyfanrwydd RNA, a defnyddir A260/A280 i farnu purdeb RNA.Mewn theori, mae gan RNA cyfan gymhareb o 28S:18S = 2.7:1, ac mae'r rhan fwyaf o ddata yn pwysleisio'r gymhareb 28S:18S = 2:1.Y ffaith yw nad oes bron dim o'r RNA a dynnwyd o samplau ac eithrio celloedd mewn cymhareb 2:1 (cafodd hyn gan ddefnyddio'r Agilent Bioanalyzer).

Mae canlyniadau electrofforesis RNA yn cael eu heffeithio gan lawer o ffactorau, gan gynnwys strwythur eilaidd, amodau electrofforesis, llwyth sampl, gradd dirlawnder gan EB, ac ati. Defnyddiwch electrofforesis brodorol i ganfod RNA a defnyddio Marciwr DNA fel rheolydd.Os yw'r 28S ar 2kb a'r 18S ar 0.9kb yn glir, a 28S: 18S > 1, gall yr uniondeb fodloni gofynion y rhan fwyaf o arbrofion dilynol.

Mae A260/A280 yn ddangosydd sydd wedi achosi llawer o ddryswch.Yn gyntaf oll, mae angen egluro ystyr gwreiddiol y dangosydd hwn ar gyfer asidau niwclëig: RNA pur, ei A260/280 = tua 2.0.RNA pur yw'r 'achos' ac A260/A280 = 2 yw'r 'effaith'.Nawr mae pawb yn defnyddio A260/A280 fel 'achos', gan feddwl “os yw A260/A280 = 2, yna mae RNA yn bur”, sy'n naturiol yn arwain at ddryswch.

Os oes gennych ddiddordeb, gallwch ychwanegu ychydig o adweithydd a ddefnyddir yn aml mewn echdynnu, fel ffenol, isothiocyanate guanidine, PEG, ac ati, i'ch sampl RNA, ac yna mesur y gymhareb A260 / A280.Y gwir amdani yw bod llawer o'r adweithyddion a ddefnyddir ar gyfer echdynnu RNA, yn ogystal â llawer o amhureddau yn y sampl, yn amsugno tua A260 ac A280, gan effeithio ar A260/A280.

Y dull mwyaf addysgiadol ar hyn o bryd yw sganio samplau RNA yn yr ystod 200-300 nm.Mae gan gromlin RNA pur y nodweddion canlynol: mae'r gromlin yn llyfn, mae A230 ac A260 yn ddau bwynt ffurfdro, A300 yn agos at 0, A260/A280 = tua 2.0, ac A260/A230 = tua 2.0.Os nad oes data sgan ar gael, rhaid pennu'r gymhareb A260/A230 hefyd, gan fod y gymhareb hon yn fwy sensitif i gario drosodd yr holl amhureddau sy'n effeithio ar yr adwaith ensymatig.Cymerwch i ystyriaeth ystod linellol y ddyfais (0.1-0.5 ar gyfer A260).

Mae dwy ffenomen ddefnyddiol arall: bydd y gymhareb tua 0.3 yn is pan fesurir A260/A280 mewn dŵr;tra bod y gymhareb a fesurir mewn EDTA 10 mM tua 0.2 yn uwch na'r hyn a fesurwyd mewn EDTA 1 mM.

Cynhyrchion cysylltiedig:

Tsieina Planhigion Cyfanswm RNA Ynysu Kit Gwneuthurwr a Chyflenwr |Foregene (foreivd.com)

Cyfres ynysu RNA Cyflenwyr a Ffatri |Cynhyrchwyr cyfres ynysu RNA Tsieina (foreivd.com)

Cyfres ynysu RNA - Foregene Co., Ltd. (foreivd.com)