Mae'r gymhareb isel o A260 / A230 fel arfer yn cael ei achosi gan amhureddau gyda'r donfedd amsugno uchaf yn 230nm.Gadewch i ni weld beth mae'r amhureddau hyn yn ei gynnwys:

• Llygryddion cyffredin	Tonfedd amsugno	Effaith cymhareb
  Protein	~230nm a 280nm	Gostyngiad ar yr un pryd o A260/A 280ac A260/A 280cymarebau
  halen Guanidine	220-240 nm	Lleihau'r A260/A 280cymhareb
  Ffenol	~270nm	-
  Trizol	~230nm a 270nm	Lleihau'r A260/A 280cymhareb
  EDTA	~230nm	Lleihau'r A260/A 280cymhareb
  Ethanol	230-240 nm	Lleihau'r A260/A 280cymhareb

 
 
 
Tonfedd amsugno a gwerth cyferbyniad llygryddion cyffredin

Phalogiad rotein
Gellir ystyried llygredd protein fel y llygredd mwyaf cyffredin yn y broses echdynnu asid niwclëig.Mae protein yn bodoli rhwng y cyfnod dyfrllyd uchaf a'r cyfnod isaforganigcyfnod .Bydd llygredd yn lleihau'r gymhareb A260/A280 ac A260/A230 ar yr un pryd, a bydd y gymhareb A260/A230 yn newid yn fwy amlwg na'r gymhareb A260/A280.
Yn ystod dilynoltrawsgrifio o chwithor adweithiau qPCR, gall gweddillion protein atal neu ymyrryd â swyddogaeth ensymau.Y ffordd orau o osgoi halogiad protein yw cadw mewn cof yr egwyddor o “yn hytrach na llai, ychydig o weithiau” wrth ddyheu am y supernatant.

2. Llygredd Guanidinium
mae hydroclorid (GuHCl) a guanidine thiocyanate (GTC) yn cael yr effaith o ddadnatureiddio proteinau, a all ddinistrio cellbilenni yn gyflym yn ystod y broses echdynnu asid niwclëig, gan achosi dadnatureiddio protein a dyddodiad.Mae tonfedd amsugno GuHCl a GTC rhwng 220-240 nm, ac mae'rbydd halen guanidiniwm gweddilliol yn lleihau'r gymhareb A260/A230.Er y bydd yr halen guanidinium gweddilliol yn lleihau'r gymhareb,mae'r effaith ar arbrofion i lawr yr afon yn ddibwys mewn gwirionedd.

3. Halogiad trizol
Prif gydran Trizol yw ffenol.Prif swyddogaeth ffenol yw lyse celloedd a rhyddhau proteinau a sylweddau asid niwclëig mewn celloedd.Er y gall ffenol ddadnatureiddio proteinau yn effeithiol, ni all atal gweithgaredd RNase yn llwyr.Felly, mae 8 -hydroxyquinoline , guanidine isothiocyanate , β-mercaptoethanol, ac ati yn cael eu hychwanegu at TRIzol i atal RNase mewndarddol ac alldarddol.
Wrth echdynnu RNA cellog, gall Trizol lyse'r celloedd yn gyflym ac atal y cnewyllyn a ryddhawyd o'r celloedd, a bydd y Trizol gweddilliol yn lleihau'r gymhareb A260 / A230 yn sylweddol.
Dull prosesu: Wrth allgyrchu, rhaid nodi bod y ffenol yn Trizol yn hawdd hydawdd yn y cyfnod dŵr o dan gyflwr 4 ° a thymheredd yr ystafell.

4. Gweddillion ethanol
Defnyddir ethanol yn y broses derfynol i waddodi'r DNA tra'n hydoddi ïonau halen a all fod yn rhwym i'r DNA.Mae tonfedd amsugno o'r uchafbrig amsugno oethanol hefyd ar 230-240 nm, syddhefyd yn lleihau'r gymhareb A260/A230.
Gellir ailadrodd y dull o osgoi gweddillion ethanol ddwywaith yn ystod yr elution terfynol, gan chwythu yn ycwfl mygdartham ddau funud i ganiatáu i'r ethanol anweddu'n llawn cyn ychwanegu byffer ar gyfer elution.
Fodd bynnag, dylid gwybod mai dim ond mynegai gwerthuso o ansawdd RNA yw'r gymhareb.Os yw'r gweithrediadau uchod yn cael eu rheoleiddio'n llym, ni fydd y gwyriad rhwng y gymhareb a'r ystod safonol yn cael effaith fawr ar arbrofion i lawr yr afon.
Cynhyrchion Cysylltiedig:
Pecyn Ynysu RNA Cyfanswm Anifeiliaid
Planhigion Pecyn Ynysu RNA Cyfanswm
Cell Cyfanswm RNA Pecyn ynysu
Plannu Pecyn Ynysu RNA Cyfanswm Plws