(96-wel) Pecyn RT-qPCR Uniongyrchol QuickEasy Cell - SYBR Gwyrdd I
Disgrifiadau
Mae'r(96-wel) QuickEasyTM Cell Uniongyrchol RT-qPCR Kit-SYBR Gwyrdd Iyn darparusystem glustogi lysis unigrywto rhyddhau RNA yn gyflymo gell ddiwylliedigsamplau ar gyfer adweithiau RT-qPCR, gan ddileu'r llafurus a llafurusProses puro RNA, a dim ond 7 munud y mae'n ei gymryd i gael y templed RNA gofynnol.Mae'r5 × Cymysgedd RT Uniongyrchola2 × Cymysgedd qPCR Uniongyrchol-SYBRa ddarperir yn y blwch yn gyflym accael meintiol amser real yn effeithiolCanlyniadau PCR.
Mae gan 5 × Direct RT Mix a 2 × Direct qPCR Mix-SYBR oddefgarwch atalydd cryf, a gallant ddefnyddio lysate y sampl i'w brofi fel templed ar gyfer trawsgrifio gwrthdro effeithlon ac ymhelaethu penodol.Mae'r adweithydd yn cynnwys Foregene Reverse Transcriptase unigryw gydag affinedd uchel ar gyfer RNA , yn ogystal â Hot D- Taq DNA Polymerase , dNTPs , MgCl2 , byffer adwaith, optimizer PCR a sefydlogwr, a gellir ei ddefnyddio ar y cyd â'r byffer lysis i ganfod y sampl yn gyflym, yn hawdd ac yn gywir, ac mae ganddo nodweddion sensitifrwydd uchel, penodoldeb cryf a sefydlogrwydd da.
Mae'r pecyn wedi'i anelu at lysis micro-system o gelloedd 96-diwylliedig yn dda, ac mae ganddo unffurfiaeth a chysondeb da;mae cydrannau'r pecyn yn darparu 96 o adweithiau lysis, 96 o adweithiau trawsgrifio gwrthdro ac adweithiau qPCR 96 × 2, sy'n gallu bodloni'r plât celloedd 96-ffynnon i'w defnyddio un-amser, gan osgoi'r llygredd a achosir gan adweithyddion yn agor, yn rhewi ac yn dadmer dro ar ôl tro a diraddio perfformiad adweithyddion.
Cydrannau Kit
| Cyfansoddiad cit ( 50 μSystem lysis L/20 μLRT system adwaith /20μL system adwaith qPCR) | DRT-03011 | Sylw | |
| 96T | |||
| RhanI | byfferCL | 5 mL | CellLysis |
| ForegeneProteas a Mwy II | 100 μL | ||
| byfferST | 500 μL | ||
| Rhan II | DNARhwbiwr | 100 μL | |
| 5 × Cymysgedd RT Uniongyrchol | 400 μL | RT | |
| 2 × Cymysgedd qPCR Uniongyrchol-SYBR | 1 mL ×2 | qPCR | |
| 50 × ROX Cyfeirnod Lliw | 400µL | ||
| RNase- Rhad ac am ddimddH2 O | 1.7mL |
| |
| Mblynyddol | 1 darn | 1 gweini | |
*: Mae'r Rhwbiwr DNA adweithydd lysis wedi'i gynnwys yn Rhan II o'r pecyn;Gellir prynu cydrannau Cell Lysis, RT, a qPCR ar wahân.
Nodweddion a manteision
■Syml ac effeithiol: gyda thechnoleg Cell Direct RT, gellir cael samplau RNA mewn dim ond 7 munud.
■ Mae'r galw sampl yn fach, gellir profi mor isel â 10 cell.
■ Trwybwn uchel: gall ganfod RNA yn gyflym mewn celloedd sydd wedi'u meithrin mewn platiau 384, 96, 24, 12, 6 ffynnon.
■ Gall Rhwbiwr DNA gael gwared ar genomau a ryddhawyd yn gyflym, gan leihau'r effaith ar ganlyniadau arbrofol dilynol yn fawr.
■ Mae system RT a qPCR wedi'i optimeiddio yn gwneud y trawsgrifiad gwrthdro RT-PCR dau gam yn fwy effeithlon a PCR yn fwy penodol, ac yn fwy gwrthsefyll atalyddion adwaith RT-qPCR.
Cais cit
Cwmpas y cais: celloedd diwylliedig.
- RNA a ryddhawyd gan lysis sampl: dim ond yn berthnasol i dempled RT-qPCR y pecyn hwn.
- Gellir defnyddio'r pecyn at y dibenion canlynol: dadansoddi mynegiant genynnau, gwirio effaith distewi genynnau wedi'i chyfryngu gan siRNA, sgrinio cyffuriau, ac ati.
Storio ac Oes Silff
Dylid storio rhan I o'r pecyn hwn yn 4℃;Dylid storio Rhan II ar -20 ℃.
Dylid storio Foregene Protease Plus II yn 4℃, peidiwch â rhewi ar -20 ℃.
Adweithydd 2×Dylid storio Direct qPCR Mix-Taqman ar -20℃yn y tywyllwch;os caiff ei ddefnyddio'n aml, gellir ei storio hefyd yn 4℃ ar gyfer storio tymor byr (defnyddiwch o fewn 10 diwrnod).
Egwyddorion dylunio paent preimio PCR Amser Real
Preimio Ymlaen a Chwith Primer
Ar gyfer PCR Amser Real, mae dylunio paent preimio yn bwysig iawn.Mae preimwyr yn gysylltiedig â phenodoldeb ac effeithlonrwydd ymhelaethu PCR, a gellir eu dylunio gan gyfeirio at yr egwyddorion canlynol:
- Hyd primer: 18-30bp.
- Cynnwys GC: 40-60%.
- Gwerth Tm: Gall meddalwedd dylunio primer, fel Primer 5, roi gwerth Tm y paent preimio.Dylai gwerthoedd Tm y paent preimio i fyny'r afon ac i lawr yr afon fod mor agos â phosibl.Gellir defnyddio'r fformiwla gyfrifo Tm hefyd: Tm = 4 °C (G + C) + 2 ° C (A + T).Wrth berfformio PCR, mae tymheredd islaw gwerth Tm preimio o 5 ° C yn cael ei ddewis yn gyffredinol fel y tymheredd anelio (gall y cynnydd cyfatebol yn y tymheredd anelio gynyddu penodolrwydd yr adwaith PCR).
- Preimwyr a chynhyrchion PCR:
- Dylunio paent preimio PCR ymhelaethu hyd cynnyrch yn ddelfrydol 100-150bp.
- Dylid osgoi paent preimio dylunio yn ardal strwythurol eilaidd y templed gymaint â phosibl.
- Osgoi ffurfio 2 neu fwy o seiliau cyflenwol rhwng 3′ pen y paent preimio i fyny'r afon ac i lawr yr afon.
- Ni all sylfaen derfynell primer 3′ fod yn bresennol gyda 3 G neu C olynol ychwanegol.
- Ni all y paent preimio eu hunain gael strwythurau cyflenwol, fel arall bydd strwythur hairpin yn cael ei ffurfio, gan effeithio ar ymhelaethiad PCR.
- Dylid dosbarthu ATCG mor gyfartal â phosibl yn y dilyniant paent preimio, a dylid osgoi sylfaen derfynell 3′ fel T.
Atodiad1:Cell UniongyrcholRT-qPCR Kit component pecyn atodol
Ateb Lysis 1.Cell
| Ateb Lysis Cell | |||
| Cydrannau Kit (System lysis 24-ffynnon / ffynnon) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Rhani | Clustog CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Clustog ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| RhanII | Rhwbiwr DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
| Cymysgedd RT | |
| Cydrannau Kit (System adwaith 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × Cymysgedd RT Uniongyrchol | 800 μl |
| RNase-ddH rhad ac am ddim2O | 1.7 ml × 2 |
| qPCR Cymysgedd | ||
| Cydrannau Kit (System adwaith 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2 × Cymysgedd-Taqman qPCR Uniongyrchol | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 |
| 20 × ROX Cyfeirnod Lliw | 40 μl | 200 μl |
| RNase-ddH rhad ac am ddim2O | 1.7 ml | 10 ml |
Llawlyfrau cyfarwyddiadau:
