Cell Uniongyrchol RT qPCR Kit - SYBR GWYRDD I Cell Uniongyrchol Lysis Cell Pecynnau Un-cam qRT-PCR Barod
Disgrifiadau
Mae'r pecyn hwn yn defnyddio system glustogi lysis unigryw a all ryddhau RNA yn gyflym o samplau celloedd diwylliedig ar gyfer adweithiau RT-qPCR, a thrwy hynny ddileu'r broses buro RNA llafurus a llafurus.Gellir cael y templed RNA mewn dim ond 7 munud.Yr 5×Cymysgedd RT Uniongyrchol a 2×Gall adweithyddion qPCR Mix-SYBR uniongyrchol a ddarperir gan y pecyn gael canlyniadau PCR meintiol amser real yn gyflym ac yn effeithiol.
5×Cymysgedd RT Uniongyrchol a 2×Mae gan qPCR Direct Mix-SYBR oddefgarwch atalydd cryf, a gellir defnyddio lysate y samplau fel y templed ar gyfer RT-qPCR yn uniongyrchol.Mae'r pecyn hwn yn cynnwys y transcriptase gwrthdro Foregene tra-ffinedd uchel unigryw RNA, a pholymeras DNA D-Taq Hot, dNTPs, MgCl2, byffer adwaith, optimizer PCR a sefydlogwr.
Manylebau
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Cydrannau Kit
| Rhan I | Clustog CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Clustog ST | |
| Rhan II | Rhwbiwr DNA |
| 5 × Cymysgedd RT Uniongyrchol | |
| 2 × Cymysgedd qPCR Uniongyrchol-SYBR | |
| 50 × ROX Cyfeirnod Lliw | |
| RNase-Free ddH2O | |
| Cyfarwyddiadau | |
Nodweddion a manteision
■Syml ac effeithiol: gyda thechnoleg Cell Direct RT, gellir cael samplau RNA mewn dim ond 7 munud.
■ Mae'r galw sampl yn fach, gellir profi mor isel â 10 cell.
■ Trwybwn uchel: gall ganfod RNA yn gyflym mewn celloedd sydd wedi'u meithrin mewn platiau 384, 96, 24, 12, 6 ffynnon.
■ Gall Rhwbiwr DNA gael gwared ar genomau a ryddhawyd yn gyflym, gan leihau'r effaith ar ganlyniadau arbrofol dilynol yn fawr.
■ Mae system RT a qPCR wedi'i optimeiddio yn gwneud y trawsgrifiad gwrthdro RT-PCR dau gam yn fwy effeithlon a PCR yn fwy penodol, ac yn fwy gwrthsefyll atalyddion adwaith RT-qPCR.
Cais cit
Cwmpas y cais: celloedd diwylliedig.
- RNA a ryddhawyd gan lysis sampl: dim ond yn berthnasol i dempled RT-qPCR y pecyn hwn.
- Gellir defnyddio'r pecyn at y dibenion canlynol: dadansoddi mynegiant genynnau, gwirio effaith distewi genynnau wedi'i chyfryngu gan siRNA, sgrinio cyffuriau, ac ati.
Diagram
Storio ac Oes Silff
Dylid storio rhan I o'r pecyn hwn ar 4 ℃;Dylid storio Rhan II ar -20 ℃.
Dylid storio Foregene Protease Plus II yn 4℃, peidiwch â rhewi ar -20 ℃.
Adweithydd 2×Dylid storio Direct qPCR Mix-SYBR ar -20℃yn y tywyllwch;os caiff ei ddefnyddio'n aml, gellir ei storio hefyd yn 4℃ ar gyfer storio tymor byr (defnyddiwch o fewn 10 diwrnod).
Egwyddorion dylunio paent preimio PCR Amser Real
Preimio Ymlaen a Chwith Primer
Ar gyfer PCR Amser Real, mae dylunio paent preimio yn bwysig iawn.Mae preimwyr yn gysylltiedig â phenodoldeb ac effeithlonrwydd ymhelaethu PCR, a gellir eu dylunio gan gyfeirio at yr egwyddorion canlynol:
Hyd primer: 18-30bp.
Cynnwys GC: 40-60%.
Gwerth Tm: Gall meddalwedd dylunio primer, fel Primer 5, roi gwerth Tm y paent preimio.Dylai gwerthoedd Tm y paent preimio i fyny'r afon ac i lawr yr afon fod mor agos â phosibl.Gellir defnyddio'r fformiwla gyfrifo Tm hefyd: Tm = 4 °C (G + C) + 2 ° C (A + T).Wrth berfformio PCR, mae tymheredd islaw gwerth Tm preimio o 5 ° C yn cael ei ddewis yn gyffredinol fel y tymheredd anelio (gall y cynnydd cyfatebol yn y tymheredd anelio gynyddu penodolrwydd yr adwaith PCR).
Preimwyr a chynhyrchion PCR:
Dylunio paent preimio PCR ymhelaethu hyd cynnyrch yn ddelfrydol 100-150bp.
Dylid osgoi paent preimio dylunio yn ardal strwythurol eilaidd y templed gymaint â phosibl.
Osgoi ffurfio 2 neu fwy o seiliau cyflenwol rhwng 3′ pen y paent preimio i fyny'r afon ac i lawr yr afon.
Ni all sylfaen derfynell primer 3′ fod yn bresennol gyda 3 G neu C olynol ychwanegol.
Ni all y paent preimio eu hunain gael strwythurau cyflenwol, fel arall bydd strwythur hairpin yn cael ei ffurfio, gan effeithio ar ymhelaethiad PCR.
Dylid dosbarthu ATCG mor gyfartal â phosibl yn y dilyniant paent preimio, a dylid osgoi sylfaen derfynell 3′ fel T.
Atodiad 1: Pecyn atodol cydran Cell Direct RT-qPCR Kit
1.Ateb Lysis Cell
|
| |||
| Cydrannau Kit (System lysis 24-ffynnon / ffynnon) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Rhani | Clustog CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Clustog ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| RhanII | Rhwbiwr DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
Cymysgedd 2.RT
|
| |
| Cydrannau Kit (System adwaith 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × Cymysgedd RT Uniongyrchol | 800 μl |
| RNase-ddH rhad ac am ddim2O | 1.7 ml × 2 |
|
| ||
| Cydrannau Kit (System adwaith 20 μl) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2 × Cymysgedd qPCR Uniongyrchol-SYBR | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 |
| 50 × ROX Cyfeirnod Lliw | 40 μl | 200 μl |
| RNase-ddH rhad ac am ddim2O | 1.7 ml | 10 ml |
Llawlyfrau cyfarwyddiadau:
