Canllawiau ar gyfer dadansoddi problemau

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

Ni ellir echdynnu RNA neu mae cynnyrch asid niwclëig yn isel

Fel arfer mae yna lawer o ffactorau sy'n effeithio ar effeithlonrwydd adfer, megis: cynnwys RNA sampl, dull gweithredu, cyfaint elution, ac ati.

Dadansoddiad o achosion cyffredin:

1.Ice bath neu dymheredd isel (4 ° C) centrifugation yn ystod gweithrediad.

Awgrym: Tymheredd ystafell (15-25 ° C) gweithrediad, byth bath iâ a centrifuge tymheredd isel.

2. storio sampl amhriodol neu storio sampl am gyfnod rhy hir.

Awgrym: Storio samplau ar -80 ° C neu eu rhewi mewn nitrogen hylifol, ac osgoi defnydd rhewi-dadmer dro ar ôl tro;ceisio defnyddio samplau a gasglwyd yn ffres ar gyfer echdynnu RNA.

3.Insufficient sampl lysis

Argymhelliad: Sicrhewch fod y sampl a'r hydoddiant gweithio (Acrylamid Llinol) wedi'u cymysgu'n drylwyr a'u deor am 10 munud ar dymheredd ystafell (15-25 ° C)

4.Ychwanegwyd yr eluent yn anghywir

Argymhelliad: Gwnewch yn siŵr bod ddH2O heb RNase yn cael ei ychwanegu at ganol pilen y golofn puro

Cyfrol 5.Improper o ethanol anhydrus yn Buffer viRW2

Awgrym: Dilynwch y cyfarwyddiadau, ychwanegwch y cyfaint cywir o ethanol anhydrus i Buffer viRW2 a chymysgwch nhw ymhell cyn defnyddio'r pecyn.

Defnydd sampl 6.Improper.

Awgrym: 200µl o sampl fesul 500μl o Buffer viRL.Bydd cyfaint sampl gormodol yn arwain at gyfradd echdynnu RNA is.

Cyfrol elution 7.Improper neu elution anghyflawn.

Awgrym: Cyfaint eluent y golofn puro yw 30-50μl;os nad yw'r effaith elution yn foddhaol, argymhellir ychwanegu ddH heb RNase wedi'i gynhesu ymlaen llaw₂O ac ymestyn yr amser gosod ar dymheredd ystafell, fel 5-10 munud

Mae gan golofn 8.Purification weddillion ethanol ar ôl rinsio yn Buffer viRW2.

Awgrym: Os bydd ethanol yn parhau i fod ar ôl ar ôl rinsio yn Buffer viRW2 a centrifugation tiwb gwag am 2 funud, gellir gadael y golofn buro ar dymheredd ystafell am 5 munud ar ôl centrifugation tiwb gwag i gael gwared ar yr ethanol sy'n weddill yn llawn.

Diraddio moleciwlau RNA wedi'u puro

Mae ansawdd yr RNA wedi'i buro yn gysylltiedig â ffactorau megis storio sampl, halogiad RNase, a gweithrediad.

Dadansoddiad o achosion cyffredin:

1. Ni arbedwyd y samplau a gasglwyd mewn pryd.

Awgrym: Os na ddefnyddir y sampl mewn pryd ar ôl ei gasglu, storiwch ef ar -80 ℃ neu nitrogen hylifol ar unwaith.Ar gyfer echdynnu moleciwlau RNA, ceisiwch ddefnyddio samplau a gasglwyd yn ffres pryd bynnag y bo modd.

Roedd samplau 2.Collected yn rhewi ac yn dadmer dro ar ôl tro.

Awgrym: Osgowch rewi a dadmer dro ar ôl tro (dim mwy nag unwaith) wrth gasglu a storio samplau, fel arall bydd cynnyrch asid niwclëig yn lleihau.

Cyflwynwyd 3.RNase yn yr ystafell weithredu neu ni wisgwyd menig tafladwy, masgiau, ac ati.

Awgrym: Mae echdynnu moleciwlau RNA arbrawf yn cael ei berfformio orau mewn ystafell weithredu RNA ar wahân, ac mae'r bwrdd arbrofol yn cael ei lanhau cyn yr arbrawf.Gwisgwch fenig a masgiau tafladwy yn ystod yr arbrawf i osgoi diraddio RNA a achosir gan gyflwyniad RNase.

4.Mae'r adweithydd wedi'i halogi gan RNase yn ystod y defnydd.

Awgrym: Gosod Pecyn Ynysu RNA Feirol newydd yn ei le ar gyfer arbrofion cysylltiedig.

5. Yr halogiad RNase o'r tiwbiau centrifuge, blaenau pibed, ac ati. Awgrym: Gwnewch yn siŵr bod y tiwbiau centrifuge, blaenau pibed, a phibedau i gyd yn rhydd o RNase.

Effeithiodd y moleciwlau RNA puro ar arbrofion i lawr yr afon

Bydd y moleciwlau RNA sy'n cael eu puro gan y golofn puro yn effeithio ar arbrofion i lawr yr afon os oes gormod o ïonau halen neu broteinau, megis: trawsgrifiad gwrthdro, Northern Blot, ac ati.。

1.Mae ïonau halen yn weddill yn y moleciwlau RNA eliwiedig.

Argymhelliad: Gwnewch yn siŵr bod y cyfaint cywir o ethanol anhydrus wedi'i ychwanegu at Buffer viRW2, a golchwch y golofn puro ddwywaith yn ôl y cyflymder allgyrchu cywir ar y cyfarwyddiadau gweithredu ；Os oes ïonau halen yn weddill, gallwch ychwanegu Buffer viRW2 i'r golofn puro, a'i adael ar dymheredd yr ystafell am 5 munud.Yna perfformio centrifugation i gael gwared ar halogiad ïonau halen i'r graddau mwyaf

2.Mae ethanol yn weddill yn y moleciwlau RNA eliwiedig

Awgrym: unwaith y bydd cadarnhau bod colofnau puro wedi'u rinsio gan Buffer viRW2, perfformio centrifugation tiwb gwag yn ôl y cyflymder allgyrchol ar y cyfarwyddiadau gweithredu.Os oes ethanol yn weddill o hyd, gellir ei adael am 5 munud ar dymheredd yr ystafell ar ôl centrifugation tiwb gwag i gael gwared ar yr ethanol sy'n weddill i'r graddau mwyaf.

Llawlyfrau cyfarwyddiadau:

Llawlyfr Cyfarwyddiadau Pecyn Ynysu RNA firaol